山羊NR1D1基因真核表达载体的构建及生物信息学分析

作者：王逸群; 高登科; 赵泓淙; 李丹; 马白荣; 刘盼盼; 孙乐桐; 靳亚平; 陈华涛^*

来源：中国畜牧杂志, 2022, 58(10): 215-222.

DOI：10.19556/j.0258-7033.20210825-06

• 山羊
• NR1D1
• 真核表达载体
• 生物信息学分析

本研究旨在构建山羊核受体NR1D1基因的真核表达载体，以探究其在山羊生物钟系统中的功能。从山羊卵巢组织提取总RNA，反转录合成cDNA后通过PCR扩增山羊NR1D1基因的编码序列（Coding Sequence,CDS）。将获得的目的片段与酶切线性化的真核表达载体pcDNA3.1-Puro-N-3HA进行同源重组连接，把PCR、酶切和测序鉴定正确的重组质粒命名为pcDNA3.1-3HA-g NR1D1。将pcDNA3.1-Puro-N-3HA质粒和pcDNA3.1-3HA-g NR1D1重组质粒转染至HEK293T细胞，通过实时荧光定量PCR(qPCR)和Western Blotting技术检测重组质粒的过表达效果，同时对NR1D1基因进行生物信息学分析。结果显示：pcDNA3.1-3HA-g NR1D1真核表达载体构建成功，且与转染pcDNA3.1-Puro-N-3HA组相比，pcDNA3.1-3HA-g NR1D1真核表达载体转染组中NR1D1基因在mRNA和蛋白表达水平均显著升高；山羊NR1D1基因CDS区长度为1851bp，共编码616个氨基酸；山羊NR1D1蛋白为不稳定蛋白，不含跨膜结构和信号肽，且该蛋白的三级结构与人和小鼠高度相似。本研究成功构建了山羊NR1D1基因的真核表达载体，在mRNA和蛋白水平验证了其在HEK293T细胞的过表达效果，为进一步研究山羊NR1D1基因的生物学功能提供了前期基础。

• 单位
  西北农林科技大学