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摘要
为了获得人参链格孢病菌(Alternaria panax)高质量可用于遗传转化的原生质体，本文研究了菌丝培养方式及菌龄、不同酶系酶解液组成、酶解时间、酶解转数和温度及渗透压稳定剂种类等因素对人参链格孢原生质体制备条件和再生菌株的影响。结果表明人参链格孢在150 r/min，25℃振荡培养3 d获得的人参链格孢菌丝，置于渗透压稳定剂为0.7 mol NaCl，崩溃酶、蜗牛酶、溶壁酶的质量浓度配比分别为1%、0.1%和1%酶解体系中，25℃水平摇床，90 r/min孵育2.5 h，，酶解5%(g/mL)的人参链格孢菌丝可以获得(2.96±0.08)×107个/mL原生质体。将原生质体涂布于再生培养基后，得到再生菌株的菌落形态、生长速率和致病力与野生型无明显差异。在此条件下制备的原生质体的质量能够满足遗传转化的要求，为后续通过基因敲除技术研究基因功能奠定了基础。
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