猪流行性腹泻病毒和猪博卡病毒3/4/5型二重SYBR GreenⅠ实时荧光PCR方法的建立

作者：韩昊莹; 赵宇; 郑慧华; 张鸿鑫; 侯华琳; 贾会斌; 陈红英^*

来源：中国兽医学报, 2018, 38(12): 2252-2257.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2018.12.03

• 猪流行性腹泻病毒
• 猪博卡病毒
• 荧光定量PCR

根据GenBank中登录的猪流行性腹泻病毒(PEDV)M基因序列和猪博卡病毒(PBoV)不同基因型VP1基因序列,设计2对特异性引物,分别扩增PEDV M基因与PBoV3/4/5型VP1基因,回收扩增产物分别克隆入pMD~18-T载体,构建重组质粒,作为荧光定量PCR的模板,经过反应条件优化,建立了检测PEDV与PBoV3/4/5型的二重SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法。结果表明,该检测方法线性关系良好,能特异、敏感性检测PEDV与PBoV3/4/5型;对PEDV与PBoV3/4/5型的最低检测极限分别为72.6copies/μL和76.9copies/μL,为常规PCR方法的100～1 000倍;本研究建立的PEDV和PBoV3/4/5型荧光定量PCR方法具有良好的特异性、敏感性、重复性,为快速、高效检测PEDV和PBoV提供了技术帮助。

• 单位
  河南农业大学