丹参-葛根提取物对氧糖剥夺/复氧损伤人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的保护作用

作者：车若梅; 涂舒欣; 贺晓丽^*

来源：中国实验方剂学杂志, 2022, 28(19): 24-33.

DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20221109

• 缺血性脑卒中
• 氧糖剥夺/复氧模型
• 丹参-葛根药对
• 氧化应激
• 细胞凋亡

目的：基于氧化应激和凋亡探究丹参-葛根提取物对氧糖剥夺/复氧(OGD/R)损伤SH-SY5Y细胞的保护作用。方法：采用水提法制备不同配伍比例丹参-葛根提取物，体外培养人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞并建立OGD/R损伤模型，采用细胞增殖与活性检测(CCK-8)法筛选最佳配伍比例提取物用于后续实验。将SH-SY5Y细胞分为空白组、OGD/R组和丹参-葛根(SP)提取物低、中、高剂量组(10、30、100 mg·L-1)，除空白组外，其余各组细胞在氧糖剥夺4 h后迅速复氧12 h进行OGD/R造模。采用CCK-8法检测细胞存活率，显微条件下观察细胞形态，分光光度计法检测乳酸脱氢酶(LDH)释放率、超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)含量，2,7-二氯二氢荧光素二乙酸酯荧光探针法(DCFH-DA)检测细胞活性氧(ROS)水平，JC-1法检测线粒体膜电位，Hoechst 33342染色法观察细胞核形态，流式细胞术结合异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)双染检测细胞凋亡。结果：丹参-葛根2∶1配伍时SH-SY5Y细胞的存活率最佳，与空白组比较，OGD/R组细胞形态破损，细胞上清液LDH释放率、细胞ROS水平和MDA含量显著升高(P<0.01),SOD活性和GSH水平显著降低(P<0.01)，线粒体膜电位下降，细胞凋亡率升高(P<0.01)；与OGD/R组比较，SP提取物各给药组可呈浓度依赖性地提高细胞存活率，改善细胞形态，降低细胞上清液LDH释放率(P<0.01);SP提取物30、100 mg·L-1组可明显降低细胞内ROS水平，明显提高细胞中SOD活性和GSH水平(P<0.05,P<0.01),100 mg·L-1可明显降低细胞内MDA含量(P<0.05)；此外，丹参-葛根提取物给药后可提高线粒体膜电位，30、100 mg·L-1可显著降低细胞凋亡率(P<0.01)。结论：丹参-葛根提取物2∶1配伍对OGD/R损伤的SH-SY5Y细胞有较好的保护作用，这可能与其降低细胞氧化损伤，抑制细胞凋亡相关。

• 单位
  中国医学科学院药用植物研究所