非洲猪瘟病毒C84L蛋白通过激活NLRP3炎症小体上调炎症因子的表达

作者：唐静; 马旭升; 石正旺; 代军飞; 叶得河; 王萌; 马永华^*; 郑海学^*

来源：中国兽医科学, 2023, (01): 1-12.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2024.0008

• 非洲猪瘟病毒
• 细胞因子
• C84L
• NF-κB
• NLRP3

探索非洲猪瘟病毒（African swine fever virus，ASFV）调控细胞因子的产生和细胞死亡的机制。利用NLRP3炎症小体表达系统，筛选发现ASFV-C84L蛋白诱导NLRP3炎症小体介导的IL-1β的分泌上调。首先，利用生物信息学分析C84L的结构信息，通过实时荧光定量PCR（qPCR）和间接免疫荧光试验（IFA）确定C84L蛋白在ASFV感染后的表达时序，细胞内定位；同时，用荧光素酶活性检测和蛋白免疫印迹（Western-blot）确定C84L蛋白参与调控p65的磷酸化以及IL-1β的成熟和细胞焦亡；然后，用碘化丙啶染色观察C84L蛋白诱导细胞的死亡情况；最后，使用qPCR和酶联免疫吸附试验检测C84L蛋白对IL-1β、IL-6、TNF-α等细胞因子转录和分泌的影响。结果显示：C84L为亲水性蛋白，与沙门菌效应蛋白 SifA具有同源性；ASFV感染原代猪肺泡巨噬细胞4 h后，C84L mRNA表达水平逐渐上调，后续持续表达，第8小时达到顶峰；而且IFA结果显示，C84L蛋白在细胞质和细胞核中均有定位。荧光素酶和Western-blot结果显示，C84L促进p65的磷酸化并激活NF-κB启动子的活化。PI染色结果显示，C84L真核质粒转染细胞后诱导细胞死亡，Western-blot结果也显示C84L诱导Caspase-1成熟以及膜孔蛋白N-GSDMD（GSDMD剪切后的N端片段）剪切。将C84L真核质粒转染细胞后，IL-1β、IL-6、TNF-α等细胞因子转录水平呈剂量依赖性升高；与转录水平相似，C84L表达诱导IL-1β、IL-6、TNF-α分泌水平上调。结论：ASFV C84L蛋白通过激活NF-κB以及NLRP3炎症小体诱导IL-1β、IL-6、TNF-α等促炎细胞因子上调以及细胞焦亡的发生。

• 单位
  中国农业科学院兰州兽医研究所; 兰州大学; 甘肃农业大学