妊娠期肝内胆汁淤积症中Beclin2通过介导自噬对滋养细胞凋亡的影响

作者：王芳; 黄荣; 谢恺俐^*

来源：中华细胞与干细胞杂志(电子版), 2021, 11(03): 171-178.

• Beclin2
• 妊娠期肝内胆汁淤积症
• 自噬
• 细胞凋亡

目的探讨Beclin2在妊娠期肝内胆汁淤积症 (ICP)产妇胎盘中的表达及其对滋养细胞的作用机制。方法选取2018年3月至2019年3月于株洲市中心医院产科住院分娩的ICP产妇30例作为研究对象,ICP轻度产妇和ICP重度产妇的胎盘组织各15例,另取同时期住院分娩的15例正常孕产妇作为对照组。免疫组化检测胎盘组织Beclin2蛋白表达。采用不同浓度 (0、2、20、100 μmol/L)的牛磺胆酸 (TCA)处理滋养细胞,以建立ICP体外细胞模型。后期实验另设空白对照组 (细胞未做任何处理)、si-NC组 (转染si-NC)和si-Beclin2组 (转染si-Beclin2)、TCA组 (添加100 μmol/L TCA)、TCA+si-NC组 (添加100 μmol/L TCA并转染si-NC)和TCA+si-Beclin2组 (添加100 μmol/L TCA并转染si-Beclin2);CCK-8检测滋养细胞增殖;实时荧光定量PCR检测Beclin2 mRNA表达;流式细胞术检测滋养细胞凋亡;Western blot检测滋养细胞Beclin2、LC3和p62蛋白表达。多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验;胎盘中Beclin2基因的3组比较采用c2检验,组间两两比较用Bonferroni方法。结果与健康产妇相比,ICP轻度产妇和ICP重度产妇胎盘组织中Beclin2蛋白阳性率和强阳性率 (33.33﹪比86.67﹪、93.33﹪;13.33﹪比46.67﹪、66.67﹪)升高 (P 均 < 0.05/3)。与0、2 μmol/L组比较,20、100 μmol/L组细胞增殖能力24 h (0.53±0.04、0.56±0.04比0.42±0.05、0.38±0.06)、48 h (0.78±0.06、0.81±0.06比0.60±0.05、0.55±0.06)和72 h (0.94±0.08、1.02±0.09比0.73±0.07、0.68±0.08)及p62蛋白表达 (1.17±0.12、0.98±0.08比0.85±0.07、0.38±0.03)均降低,Beclin2蛋白表达(0.15±0.01、0.23±0.01比0.46±0.05、0.58±0.04)、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达 (0.76±0.08、1.26±0.11比1.87±0.15、2.24±0.19)和细胞凋亡率[(3.87±0.25)﹪、(4.35±0.32)﹪比(8.67±0.59)﹪、 (26.19±1.27)﹪]均升高 (P 均 < 0.05),且呈剂量依赖性。与空白对照组相比,TCA组滋养细胞Beclin2蛋白表达 (0.25±0.03比1.28±0.11)和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达 (1.41±0.12比6.39±0.51)、细胞凋亡率[(2.53±0.17)﹪比 (28.67±2.08)﹪]均升高,p62蛋白表达(0.97±0.08比0.53±0.04)降低 (P 均 < 0.05);与TCA+si-NC组相比,TCA+si-Beclin2组滋养细胞Beclin2 蛋白表达(1.16±0.13比0.37±0.04)和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达 (5.88±0.47比2.35±0.24)、细胞凋亡率[(27.18±2.14)﹪比 (16.33±0.79)﹪]均降低,p62蛋白 (0.48±0.04比0.95±0.09)升高 (P 均 < 0.05)。结论 Beclin2在ICP产妇胎盘组织中高表达;Beclin2通过上调自噬水平促进TCA处理后滋养细胞凋亡。

• 单位
  株洲市中心医院