一株西尼罗病毒基因组cDNA亚克隆的构建与鉴定

作者：李晓峰; 姜涛; 陈水平; 秦成峰; 于曼; 秦鄂德

来源：军事医学科学院院刊, 2005, 29(05): 28-32.

DOI：10.3969/j.issn.1674-9960.2005.05.007

• 黄病毒
• 西尼罗病毒
• RT-PCR
• cDNA亚克隆 Flavivirus
• West Nile virus
• cDNA subclone

目的:构建我室保存的一株西尼罗病毒引进毒株(CH-01)基因组全长cDNA的亚克隆,为进一步构建该毒株的感染性全长cDNA克隆奠定基础。方法:根据CH-01病毒株基因组序列中含有的特异性酶切位点,利用DNAstar及O ligo6软件设计5对引物。以感染细胞中的病毒RNA为模板,通过RT-PCR扩增出覆盖病毒基因组全长的5个cDNA片段,并分别将其克隆至pGEM-T easy载体,通过片段间共有的酶切位点进行连接,最终获得基因组5′和3′半分子,并分别通过序列测定加以鉴定。结果与结论:已构建出西尼罗病毒CH-01株基因组的5′和3′半分子,经酶切鉴定和序列测定表明所获得的cDNA克隆为该株病毒...

• 单位
  病原微生物生物安全国家重点实验室; 军事医学科学院