发根农杆菌介导西瓜转基因过表达体系的建立

作者：王平勇; 徐永阳; 赵光伟; 贺玉花; 孔维虎; **; 刘水苗; 户克云; 侯冲; 王兰菊^*; 徐志红^*

来源：果树学报, 2019, 36(12): 1763-1770.

DOI：10.13925/j.cnki.gsxb.20190454

• 西瓜
• 发根农杆菌
• K599
• 过表达

【目的】建立发根农杆菌介导的西瓜转基因不定根过表达体系。【方法】探索利用野生型发根农杆菌K599侵染西瓜材料’Sugar Baby’,诱导西瓜产生不定根的实验方法。借助该方法,将含有GUS基因和EGFP基因的过表达载体pCAMBIA3301和pCAMBIA1300-ProSuper导入发根农杆菌K599,侵染西瓜材料’Sugar Baby’,通过常规PCR、qRTPCR、GUS染色和激光共聚焦显微镜检测,评价该过表达体系的效果。【结果】利用野生型和导入外源质粒的发根农杆菌均能成功诱导西瓜’Sugar Baby’产生不定根。PCR检测结果显示,携带pCAMBIA3301和pCAMBIA1300-ProSuper载体的发根农杆菌K599诱导产生的不定根阳性率达到100%。qRT-PCR、GUS染色和激光共聚焦显微镜检测均能成功检测到GUS基因和EGFP基因的过量表达。【结论】利用发根农杆菌K599诱导西瓜产生不定根介导基因过表达的方法,具有周期短,操作方便,转化率高的特点,可实现基因功能的快速验证,为西瓜根系相关基因的功能研究提供技术支持。

• 单位
  中国农业科学院郑州果树研究所; 河南农业大学园艺学院