发根农杆菌介导的闽楠遗传转化体系构建与优化

作者：吴梦洁; 洪家都; 李芳燕; 周生财; 林二培; 程龙军^*

来源：核农学报, 2023, 37(08): 1516-1522.

• 闽楠
• 遗传转化
• 发根农杆菌

闽楠[Phoebe bournei (Hemsl.) Yang]为我国重要的珍贵树种。为建立闽楠遗传转化体系，以闽楠幼苗为材料，利用p CAMBIA1300-GFP质粒转化的发根农杆菌介导植株转化。在比较注射和菌液浸泡两种侵染方式侵染效率的基础上，进一步利用正交[L9(33)]试验从菌株种类、菌液侵染浓度和侵染植株苗龄三个方面优化了遗传转化体系。另外，对不同光强影响闽楠毛状根诱导及转化率情况进行了分析。结果表明，注射法的毛状根诱导率和遗传转化率分别为80.0%、66.7%；而菌液浸泡法的诱导率和遗传转化率分别为41.2%、35.3%。正交试验中，影响闽楠毛状根诱导率和遗传转化率的主要因素为菌株种类。最大诱导率和转化效率分别达到了87.5%、70.6%。该体系的最优组合为：K599菌株在菌液浓度OD600=1.2条件下注射侵染三叶期的闽楠幼苗。此外，较弱光强(50μmol·m-2·s-1)的培养条件比较强光照(100μmol·m-2·s-1)更有利于闽楠幼苗的生长和遗传转化。本研究创建并优化了一套高效、稳定的闽楠遗传转化体系，成功获得了具有转基因毛状根的闽楠植株，为闽楠重要基因挖掘、新种质创建和遗传改良奠定了基础。

• 单位
  丽水职业技术学院; 浙江农林大学