五虎汤含药血浆与含药血清体外干预RSV诱导的树突细胞自噬影响T细胞增殖活化的研究

作者：张鑫; 王孟清^*; 罗银河^*; 丁伊

来源：中药药理与临床, 2020, 36(05): 65-73.

DOI：10.13412/j.cnki.zyyl.2020.05.001

• 五虎汤
• 树突细胞
• 呼吸道合胞病毒
• T细胞增殖活化
• 含药血清
• 含药血浆

目的:观察五虎汤含药血浆与含药血清体外干预呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)诱导的树突细胞(dendritic cells,DCs)自噬对T细胞增殖活化的影响,为揭示五虎汤治疗病毒性哮喘的机制及体外实验选择合适的研究方法提供参考依据。方法:SD大鼠予2.2 g/kg五虎汤灌胃7 d后分别制得含药血清与含药血浆,从BaLB/C小鼠骨髓中分离诱导DCs细胞,从OT2小鼠脾脏中分离CD4+T细胞,在Transwell系统里以1∶10的比例共培养,随机分为正常对照血浆组、模型血浆对照组、4.4 g/kg五虎汤5%、10%、20%含药血浆组、正常对照血清组、模型血清对照组、4.4 g/kg五虎汤5%、10%、20%含药血清组及雷帕霉素10μg/ml组、氯喹40μg/ml组,除正常对照血清组、正常对照血浆组外,各组加入含有RSV的Opti-MEM培养基(MOI=1),药物干预后,流式细胞术检测CD4+T细胞的增殖和CD69的表达。结果:RSV感染后CD4+T细胞发生明显的增殖,与正常血浆对照组比较,模型血浆对照组CD4+T淋巴细胞百分比与增殖细胞所占百分比均显著升高(P<0.01),与模型血浆对照组比较,4.4 g/kg五虎汤5%、10%、20%含药血浆组及雷帕霉素、氯喹组CD4+T淋巴细胞百分比与增殖细胞所占百分比显著降低(P<0.01),与正常血清对照组比较,模型血清对照组CD4+T淋巴细胞百分比与增殖细胞所占百分比显著升高(P<0.01),与模型血清对照组比较,4.4 g/kg五虎汤5%、10%、20%含药血清组及雷帕霉素、氯喹组CD4+T淋巴细胞百分比与增殖细胞百分比显著降低(P<0.01);RSV感染后CD4+T细胞发生明显的活化,与正常血浆对照组、正常血清对照组比较,模型血浆对照组与模型血清对照组表达CD69的T细胞比例与CD69荧光强度几何平均数(MIF)明显升高(P<0.05或P<0.01),与模型血浆对照组比较,4.4 g/kg五虎汤5%、10%、20%含药血浆与雷帕霉素、氯喹组均能使表达CD69的T细胞比例与CD69 MIF显著降低(P<0.01)。结论:RSV感染导致CD4+T细胞发生了过度的增殖与活化,5%、10%、20%的五虎汤含药血浆与含药血清可通过干预DCs自噬,抑制CD4+T细胞过度增殖与活化,含药血浆与含药血清两种方法可得出一致结论,在体外实验中均可采用。

• 单位
  湖南中医药大学第一附属医院; 湖南中医药大学