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摘要
探究体外培养的芽囊原虫的形态、体外增殖规律及不同温度保存的降解情况。从腹泻患者芽囊原虫阳性粪便中分离芽囊原虫，在IMDM培养基中培养，观察虫体形态和生殖方式。采用显微镜计数法和荧光定量PCR法(qPCR)测定芽囊原虫18S小亚基核糖体DNA (SSU rDNA)的拷贝数分析体外培养芽囊原虫的增殖情况，绘制增殖曲线，分析两种方法的相关性。芽囊原虫分别置4℃、-20℃、-80℃保存，第1～7天和第1～5周，提取虫体DNA,qPCR法检测芽囊原虫SSU rDNA，分析芽囊原虫的降解情况。形态学研究结果显示，IMDM培养基培养的芽囊原虫，可观察到空泡形、颗粒形、阿米巴形和包囊等4种常见形态和分裂生殖、出芽生殖和胞内生殖等3种生殖方式。芽囊原虫体外培养的第3～7天为快速增长期，第7天虫体密度达到峰值，显微镜计数和qPCR法测定结果分别为2.5×106个/ml和1.1×106拷贝/μl。相关性分析显示，显微镜计数和qPCR法测定结果绘制的增殖曲线的皮尔逊相关系数为0.95，呈高度相关。在4、-20和-80℃保存第7天，芽囊原虫SSU rDNA拷贝数分别为(2.75±0.20)×104、(6.84±1.33)×104、(1.39±0.06)×105拷贝/μl，为第1天拷贝数[(2.36±0.06)×105、(2.39±0.06)×105、(2.23±0.21)×105拷贝/μl)]的11.6%、28.3%和63.6%，差异有统计学意义(F=130.67,P <0.05)；在4、-20和-80℃保存第5周时，芽囊原虫SSU rDNA拷贝数分别为(3.77±0.23)×104、(4.37±0.59)×104、(3.86±0.26)×105拷贝/μl，为第1周拷贝数[(2.23±0.21)×105、(2.23±0.21)×105、(2.23±0.21)×105拷贝/μl]的2.98%、3.41%和28.74%，差异有统计学意义(F=500.51,P <0.05)。体外培养的芽囊原虫高峰期虫体形态多样，显微镜计数法和qPCR法均可用于芽囊原虫的定量，芽囊原虫在4、-20和-80℃保存均会发生降解，-80℃保存的降解程度小于4、-20℃。
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