Fas靶向RNA干扰逆转录病毒载体的构建及生物活性鉴定

作者：刘苏虎; 张王刚; 张镁; 朱青; 田玮

来源：中国实验血液学杂志, 2005, 13(05): 827-831.

DOI：10.3969/j.issn.1009-2137.2005.05.021

• RNA干扰
• Fas
• 再生障碍性贫血
• 逆转录病毒载体
• 绿色荧光蛋白

本研究构建Fas靶向RNA干扰逆转录病毒载体,为探讨抑制Fas表达在再生障碍性贫血等疾病治疗中的意义、以及为促进RNA干扰技术的广泛开展奠定基础。用PCR方法获得小鼠U6+27启动子盒及产生siRNA的相应DNA模板,然后连同增强绿色荧光蛋白(EGFP)基因克隆入商业化逆转录病毒载体pLXSN,以获得逆转录病毒载体穿梭质粒pLXSN/EGFPsiFas。包装、滴定重组逆转录病毒载体,并感染P815细胞,检测绿色荧光蛋白表达情况及对细胞Fas表达的抑制情况。结果表明:构建的逆转录病毒载体pLXSN/EGFPsiFas能够有效被包装并感染靶细胞,在靶细胞内可同时表达siRNA、绿色荧光蛋白以及新霉素抗性。结论:成功构建了抑制小鼠Fas表达的RNA干扰逆转录病毒载体。

• 单位
  西安交通大学