高糖促进小鼠肾小管上皮细胞DNMT3B表达并通过激活β-catenin信号通路促进纤维化相关蛋白分泌

作者：屈玲玲; 邹琴; 李清璇; 李晓颖; 刘忠强; 周宇霞; 郭兵; 石明隽^*

来源：细胞与分子免疫学杂志, 2021, 37(07): 608-615.

DOI：10.13423/j.cnki.cjcmi.009224

• 肾脏纤维化
• 小鼠肾小管上皮细胞(RTEC)
• DNA甲基转移酶3B(DNMT3B)
• 分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)
• Wnt
• β联蛋白(β-catenin)

目的观察高糖条件下小鼠肾小管上皮细胞(RTEC)中DNA甲基转移酶3B(DNMT3B)对分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)表达的影响及对Wnt/β联蛋白(β-catenin)信号通路的调控作用。方法将体外培养的小鼠RTEC分为正常糖(NG)组和高糖(HG)组。RTEC分别转染DNMT3B短发夹RNA(sh-DNMT3B)及DNMT3B过表达(DNMT3B-OE)质粒后,反转录PCR检测RTEC的DNMT3B、 SFRP1、Ⅳ型胶原蛋白(Col4)、纤连蛋白(FN)mRNA表达,Western blot法检测DNMT3B、 SFRP1、糖原合成酶3β(GSK3β)、磷酸化的GSK3β(p-GSK3β)、β-catenin、 Col4、 FN的蛋白表达。免疫荧光细胞化学染色检测DNMT3B和SFRP1在RTEC的表达和定位。结果与NG组相比,HG组RTEC中DNMT3B、β-catenin、 p-GSK3β、 Col4、 FN蛋白表达增加,SFRP1表达降低。与空载体组比较,敲低DNMT3B后,HG条件下RTEC的SFRP1 mRNA及蛋白表达均增加,β-catenin、 p-GSK3β、 Col4蛋白表达降低,FN的mRNA和蛋白表达均降低,而β-catenin mRNA表达无明显改变;过表达DNMT3B后,各指标表达情况与上述结果相反。DNMT3B及SFRP1在RTEC的细胞核及细胞质中均有表达,与NG组相比,HG组的细胞可见DNMT3B在细胞核内聚集,且与SFRP1的共定位增加。结论 HG刺激增加RTEC的DNMT3B表达,下调SFRP1表达,激活Wnt/β-catenin信号通路促进细胞外基质形成。

• 单位
  贵州医科大学; 贵阳市第一人民医院