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摘要
目的探讨共济失调毛细血管扩张突变基因Rad3相关激酶(ATR)/沉默细胞周期检测点激酶1(CHK1)信号通路在卵巢上皮癌发生、发展过程中的作用。方法体外培养人卵巢上皮癌细胞OVCAR3, 分为空白对照组(NC组)、siRNAsc组(转染siRNAsc的OVCAR3细胞)、siRNAATR组(转染siRNAATR的OVCAR3细胞)、VE822组(加入1μmol/L的ATR抑制剂VE822)、和siRNAATR+VE822组。采用siRNA技术和VE822干扰OVCAR3细胞中的ATR, 通过实时荧光定量PCR(qRTPCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中ATR的表达确定干扰有效后, CCK8法检测各组细胞增殖抑制情况, 流式细胞术(FCM)检测细胞周期和凋亡情况, qRTPCR检测卵巢上皮癌细胞中凋亡相关基因半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase3)、B细胞淋巴瘤2(Bcl2)、Bcl2相关X蛋白(Bax)mRNA的表达, 蛋白免疫印迹法(Western blot)检测ATR/CHK1通路相关蛋白的表达。结果 siRNA-ATR转染和VE-822干预后, 与NC组和siRNA-sc组相比, siRNA-ATR组、VE-822组、siRNA-ATR+VE-822组OVCAR3细胞中ATR的mRNA[(1.55±0.12)、(1.51±0.13)、(0.71±0.11)、(0.73±0.12)、(0.49±0.09)]表达水平显著降低(P<0.05), 细胞增殖抑制率[(0.00±0.00)%、(0.00±0.00)%、(32.84±1.08)%、(30.75±1.44)%、(43.90±1.57)%]、细胞G0/G1期的比例[(40.08±2.57)、(36.35±3.44)、(53.28±4.34)、(56.37±5.03)、(70.63±3.81)]、细胞凋亡率[(4.28±0.67)%、(5.35±0.94)%、(23.63±1.13)%、(24.57±1.20)%、(35.86±1.09)%]、Caspase-3、Bax mRNA表达明显升高(P<0.05), S期[(32.93±3.02)、(35.35±2.82)、(25.79±3.61)、(23.74±3.54)、(18.04±2.37)]和G2/M期[(26.99±2.84)、(28.30±2.72)、(20.93±3.01)、(19.98±2.87)、(11.33±2.11)]的细胞比例、Bcl-2 mRNA、ATR、p-CHK1/CHK1、细胞分裂周期蛋白25C(CDC25C)、细胞周期蛋白B1(cyclin B1)蛋白表达显著降低(P<0.05);与siRNA-ATR组相比, siRNA-ATR+VE-822组细胞中ATR的mRNA表达水平进一步降低(P<0.05), 细胞增殖抑制率、细胞凋亡、Caspase-3、Bax mRNA表达进一步增加(P<0.05), Bcl-2 mRNA、ATR、p-CHK1/CHK1、CDC25C、cyclin B1蛋白表达持续降低(P<0.05)。结论 ATR/CHK1信号通路在卵巢上皮癌OVCAR3细胞增殖过程中被激活, 抑制ATR/CHK1信号通路, 可抑制卵巢上皮癌细胞增殖, 诱导其G1/S细胞周期阻滞和细胞凋亡。
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