非洲马瘟病毒VP7蛋白在昆虫细胞中的表达及其抗体制备

作者：户鑫兵; 高闪电; 田占成; 范亚亚; 关贵全; 刘光远; 罗建勋; 殷宏^*; 独军政^*

来源：中国兽医科学, 2022, 52(03): 317-323.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2022.0044

• 非洲马瘟病毒
• VP7蛋白
• 昆虫细胞表达
• 多克隆抗体

为了表达非洲马瘟病毒(AHSV)VP7蛋白并制备其多克隆抗体，参考GenBank中已公开的AHSV基因序列，人工合成编码AHSV-1 VP7蛋白的S7基因全长序列，利用PCR技术扩增得到S7基因片段，将其克隆到p FastBacTMHTb载体上，构建重组载体p FastBacTM-AHSVS7，通过蓝白斑试验筛选出重组杆粒BacmidAHSVS7，并转染昆虫细胞，拯救获得重组杆状病毒。SDS-PAGE和Western-blot结果显示，AHSV-1 VP7重组蛋白在昆虫细胞中获得表达。利用组氨酸标签纯化树脂获得了高纯度的VP7蛋白，将其免疫新西兰大白兔制备相应的多克隆抗体，该抗体不仅能与杆状病毒重组表达的AHSV-1 VP7蛋白反应，且能识别BHK21细胞中表达的AHSV-1 VP7蛋白，具有很好的特异性。本试验成功利用杆状病毒系统表达了AHSV-1 VP7重组蛋白，并制备了多克隆抗体，这为后续AHSVVP7蛋白功能的研究以及ELISA诊断方法的建立奠定了基础。

• 单位
  江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心; 中国农业科学院兰州兽医研究所; 家畜疫病病原生物学国家重点实验室