摘要
目的 探讨白细胞介素(IL)-1β基因沉默和过表达对烟草烟雾提取物(CSE)诱导血管平滑肌细胞凋亡和炎性反应的影响。方法 根据IL-1βmRNA编码序列设计并合成小干扰RNA(siRNA)和过表达质粒,分别转染大鼠胸主动脉平滑肌细胞A7r5,实验分为对照组、模型组(CSE干预)、沉默组(siRNA-IL-1β)、沉默空载组(siRNA-EV)、过表达组(OvExp-IL-1β)、过表达空载组(OvExp-EV)。采用CSE干预除对照组的其他5组细胞。qRT-PCR检测细胞中IL-1βmRNA表达。流式细胞术检测细胞凋亡率。Western blot检测细胞中B淋巴细胞瘤2基因(Bcl-2)、Bax、TNF-α、IL-6和IL-8表达。结果 与对照组比较,模型组细胞凋亡率、Bax、IL-1βmRNA、TNF-α、IL-6和IL-8表达明显升高,Bcl-2表达明显降低(P<0.01)。与模型组比较,沉默组细胞凋亡率、Bax、IL-1βmRNA、TNF-α、IL-6和IL-8表达明显降低,Bcl-2表达明显升高(P<0.01);过表达组细胞凋亡率、Bax、IL-1βmRNA、TNF-α、IL-6和IL-8表达明显升高,Bcl-2表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。与沉默空载组比较,沉默组细胞凋亡率、IL-1βmRNA、TNF-α、IL-6和IL-8明显降低(P<0.05,P<0.01)。与沉默空载组比较,沉默组细胞中Bax表达明显降低[(0.35±0.02)μg/ml vs(0.42±0.02)μg/ml,P<0.01],Bcl-2表达明显升高[(0.45±0.02)μg/ml vs(0.37±0.01)μg/ml,P<0.01]。结论 CSE可诱导大鼠胸主动脉平滑肌细胞凋亡和炎性反应,IL-1β基因沉默可抑制CSE诱导的细胞凋亡和炎性反应;反之,IL-1β基因过表达可进一步促进细胞凋亡和炎症水平。
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单位华中科技大学同济医学院附属普爱医院