酸性亮氨酸核磷酸蛋白32B促肿瘤机制的体外研究

作者：朱晓娜; 杨烁; 何平; 张辉林; 冯茹; 余韵

来源：诊断学理论与实践, 2018, 17(02): 186-190.

DOI：10.16150/j.1671-2870.2018.02.013

• 酸性亮氨酸核磷酸蛋白32B
• 核浆转运蛋白α6
• 相互作用
• BT549细胞株

目的:探讨酸性亮氨酸核磷酸蛋白32B(acidic leucine-rich nuclear phosphoprotein 32B,ANP32B)促进肿瘤发生、发展的分子机制,为其可能作为治疗靶点提供理论依据。方法:利用免疫沉淀联合质谱技术寻找和验证ANP32B相互作用蛋白;免疫荧光技术检测ANP32B和核浆转运蛋白α6(karyopherinα6,KPNA6)在细胞内的定位;采用短发夹RNA(short hairpin RNA,sh RNA)沉默KPNA6的表达;行GST-pulldown实验明确ANP32B与KPNA6直接结合及相互作用的区域。结果:通过免疫沉淀和质谱鉴定发现,ANP32B与KPNA6间存在相互作用,两者的结合不依赖ANP32B N端1161氨基酸序列。体外GST-pulldown实验证实,KPNA6与ANP32B间存在直接的相互作用,且两者结合依赖ANP32B的核定位信号。利用sh RNA抑制KPNA6的表达后,并不影响ANP32B的核内定位。结论:ANP32B通过核定位信号序列与KPNA6结合,两者在细胞核中有明显的共定位,而敲除KPNA6并不影响ANP32B的核内定位。

• 单位
  上海交通大学医学院附属瑞金医院