慢病毒的超滤浓缩及细胞感染效应

作者：郭玲慧; 王炜; 张岱; 张燕; 苏航; 任伟宏^*

来源：中国热带医学, 2021, 21(04): 320-324.

DOI：10.13604/j.cnki.46-1064/r.2021.04.04

• 慢病毒
• 超滤浓缩
• 细胞感染
• 荧光信号

目的构建pLVX-CD63-mNeptune-Puro重组质粒,使用HEK293T细胞包装慢病毒,探讨慢病毒经超滤浓缩后的纯化效果极其对MGC-803细胞的转染效应。方法使用重叠PCR方法构建CD63-mNeptune融合基因,并插入pLVX-Puro载体构建转移质粒。转移质粒、包装质粒和外膜蛋白质粒共转染HEK293T细胞包装慢病毒颗粒。收集转染后48 h及72 h细胞培养液,4℃下2 500×g离心10 min去除细胞沉淀和碎片,上清液通过0.45μm PVDF Millex-HV滤器过滤,收集滤液于15 mL离心管。取1 mL滤液于1.5 mL EP管,余下滤液用截留分子量100 000超滤管进行浓缩。使用P24检测试剂盒检测浓缩前后细胞培养液中病毒颗粒数。分别使用未浓缩慢病毒液与超滤浓缩慢病毒液感染MGC-803细胞。通过观察MGC-803细胞荧光信号来比较慢病毒的感染率。结果成功构建慢病毒转移质粒并使用HEK293T细胞包装出慢病毒颗粒,细胞上清液中的慢病毒颗粒数经超滤浓缩后浓度提高了264倍,使用超滤浓缩的慢病毒液感染细胞后,荧光显微镜观察到携带荧光信号的活细胞多于未浓缩慢病毒液。结论超滤浓缩可以提高慢病毒颗粒浓度,并提高细胞感染率。采用超滤浓缩慢病毒的方法适合大多数普通实验室操作。

• 单位
  河南中医药大学; 第一附属医院检验科