MiR-155与KLF4的靶向结合对肾小管上皮细胞MMPs表达的影响

作者：宁雅娴; 王俭勤; 王晓元

来源：四川大学学报（医学版）, 2017, 48(02): 197-202.

DOI：10.13464/j.scuxbyxb.2017.02.006

• 慢性肾功能不全
• 微小RNA155
• Kruppel样因子4
• 基质金属蛋白酶

目的研究miR-155是否通过下调靶基因Kruppel样因子4(KLF4)影响肾小管上皮细胞中基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)和MMP-9的表达。方法首先验证miR-155是否可以抑制肾小管上皮细胞中MMPs的表达和活性及其对KLF4表达影响:miR-155-mimic、miR-155mimic-对照(空质粒)、空白培养基转染离体培养的肾小管上皮细胞,6h后,荧光定量RT-PCR检测miR-155表达,免疫印迹试验(Western blot)检测细胞MMP-2、MMP-9、KLF4的表达,明胶酶谱检测细胞中MMP-2和MMP-9的活性。生物信息学预测miR-155潜在靶基因为KLF4后,验证miR-155是否是通过靶向抑制KLF4发挥其作用:肾小管上皮细胞用过表达miR-155的质粒转染后,再进一步转染KLF4过表达质粒或空质粒,6h后Western blot和明胶酶谱法再次检测上述指标。另取细胞,分别构建包含KLF4-3′-UTR野生型和突变型序列的荧光素酶质粒,与miR-155-mimic或者空质粒对照共转染肾小管上皮细胞,24h后荧光素酶试验检测miR-155对KLF4基因的靶向抑制。结果相比转染miR-155mimic-对照的细胞,转染了miR-155-mimic的细胞miR-155表达上调,KLF4的表达受到抑制,MMP-2、MMP-9的表达和活性下降。相比于转染miR-155质粒和转染miR-155+空质粒,转染过表达KLF4+miR-155质粒的细胞KLF4表达上调,MMP-2、MMP-9的表达和活性增加。荧光素酶试验验证miR-155可与KLF4靶向结合。结论 MiR-155可以通过靶向作用下调KLF4,从而抑制肾小管上皮细胞中MMP-2、MMP-9的表达和活性。

• 单位
  兰州大学第二医院