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摘要
为了建立可同时检测超级细菌blaNDM-1基因和mcr-1基因的快速检测方法,针对blaNDM-1基因和mcr-1基因保守序列设计特异性引物和TaqMan探针,以构建含有blaNDM-1基因和mcr-1基因片段的重组质粒作为阳性标准品,通过优化各种反应条件,建立同时检测blaNDM-1基因和mcr-1基因的双重荧光定量PCR方法。该方法能够特异性扩增blaNDM-1基因和mcr-1基因质粒标准品,而对照标准菌株的检测结果均为阴性。两种质粒标准品的检出下限均为1.63×101拷贝/μL,比常规PCR敏感性高100倍;组内和组间重复试验的变异系数均小于2%。应用所建立的方法对55株鸡源致病性沙门氏菌、10株生鲜畜禽产品源大肠杆菌临床分离株进行检测,未发现携带blaNDM-1基因和mcr-1基因的沙门氏菌分离株,发现2株携带blaNDM-1基因和1株携带mcr-1基因的大肠杆菌分离株。结果表明,本研究所建立的双重荧光定量PCR检测方法特异性强、敏感性高、重复性好,为blaNDM-1基因和mcr-1基因的快速检测提供了有效的技术手段。
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