HCV包膜糖蛋白E2基因的克隆、蛋白表达及纯化

作者：杜德伟; 贾战生; 秦鸿雁; 刘秋平; 周永兴; 韩骅

来源：世界华人消化杂志, 2004, (02): 69-72.

DOI：10.3969/j.issn.1009-3079.2004.02.015

目的:获得大量重组HCVE2蛋白,为研究E2蛋白的功能及制备其抗体奠定基础.方法:利用PCR方法从HCV基因组序列中扩增出831bp(384-661aa)的E2基因片段并按读框克隆到原核表达载体pET32a(+)上,得到重组质粒pET32a-HCVE2,转化大肠杆菌BL-21(DE3)菌株,IFFG诱导HCVE2蛋白表达,SDS-PAGE和Westernblot检测蛋白表达,Ni-NTA偶联的琼脂糖黏附柱纯化融合蛋白.结果:经IPTG诱导后,可见分子量约55000的融合蛋白表达;表达的蛋白主要以包涵体形式存在;经Ni-NTA偶联的琼脂糖黏附柱纯化的融合蛋白与抗His抗体及HCV阳性血清具有良好的反应原性.结论:HCVE2基因的克隆、表达及其融合蛋白的纯化为进一步开展HCVE2蛋白功能和HCV受体的研究奠定了基础.

• 单位
  中国人民解放军第四军医大学; 中国人民解放军第四军医大学唐都医院