微小RNA-19b调节锌指蛋白13对骨肉瘤细胞增殖凋亡的影响

作者：王庆生; 孙晓海; 叶湛; 李祥; 王发圣; 刘勇^*

来源：中华实验外科杂志, 2019, 36(12): 2254-2256.

• 骨肉瘤
• 微小RNA-19b
• Kruppel样因子13
• 细胞增殖
• 凋亡

目的观察微小RNA(miRNA, miR)-19b是否通过转录后上调癌基因低密度脂蛋白受Kruppel样因子13(KLF13)的表达而促进人骨肉瘤细胞增殖与凋亡。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测人骨肉瘤细胞株和正常人成骨细胞中miR-19b与KLF13基因的表达;使用miR-19b抑制物(hsa-miR-19b inhibitor)抑制骨肉瘤细胞株中miR-19b的表达活性, 应用荧光素酶活性实验和蛋白质印迹法(Western blot)检测miR-19b与靶基因KLF13表达调控的影响。并进一步采用四唑氮化合物(MTS)法和流式细胞仪检测MG-63细胞的增殖和凋亡变化。结果 miR-19b及KLF13基因在骨肉瘤细胞株(MG-63、US-OS和Saos-2)及人成骨细胞(hFOB 1.19)相对表达分别为665.66±39.74、517.75±26.82、564.88±41.20和16.09±4.80, 差异有统计学意义(均P<0.05)。荧光素报告载体实验表明KLF13是miR-19b直接调控的靶基因。Western blot检测结果提示, 导入反义寡核苷酸抑制miR-19b的表达后, KLF13的表达水平明显下降, 对照组为0.783±0.053, 实验组分别为0.424±0.021、0.265±0.016。进一步观察到此时骨肉瘤细胞MG-63的增殖能力显著抑制、凋亡显著增加, 与阴性对照组比较差异有统计学意义(均P<0.01);而抑制KLF13的表达可以明显促进miR-19b介导的骨肉瘤细胞增殖和凋亡抑制。结论 miR-19b可通过上调靶向癌基因KLF13的表达来促进骨肉瘤细胞的增殖和抑制骨肉瘤细胞的凋亡。

• 单位
  华中科技大学同济医学院附属协和医院; 福建医科大学附属第一医院; 台州市第一人民医院