分泌型毕赤酵母人全长抗体库的构建与鉴定

作者：刘强; 张晶; 张小爱; 杨小盼; 华玲; 高新; 付洁; 宋海峰

来源：细胞与分子免疫学杂志, 2014, 30(01): 58-62.

DOI：10.13423/j.cnki.cjcmi.008311

• 毕赤酵母
• 人全长抗体
• N-糖基化改造
• 抗体库
• 分泌表达

目的基于N-糖基化部分改造毕赤酵母构建表达分泌型人全长抗体库。方法基于酵母分泌型表达载体pPICZαA构建双启动子串联表达重链和轻链恒定区基因的载体pPICZαA-C H-C L,经基因序列分析和Western blot分析验证。设计44对简并引物经逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)从人外周血单个核细胞(PBMC)中扩增获得轻链可变区V L和重链可变区V H基因库。通过PCR将其插入上述恒定区表达载体构建全长抗体表达库pPICZαA-V H-C H-V L-C L。将该库电转化N-糖基化部分改造后宿主菌株GS115Y。随机挑取20个平板克隆进行菌液PCR鉴定、基因分析,并提交IgBLAST-imgt数据库鉴定抗体库正确性与多样性。结果获得表达重链和轻链恒定区的表达载体pPICZαA-C H-C L,并在此基础上初步获得全长抗体表达库pPICZαA-V H-C H-V L-C L,库容量为105。结论成功构建了分泌型N-糖基化毕赤酵母人全长抗体库。

• 单位
  病原微生物生物安全国家重点实验室; 军事医学科学院放射与辐射医学研究所