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摘要
背景:原代软骨细胞体外培养是研究骨骼生长的重要方法之一。目前原代软骨细胞的分离方法主要有单独消化法和分步消化法,但两种方法对软骨细胞生物学性能的影响尚不清楚。目的:比较两种方法对新生大鼠软骨细胞生物学性能的影响,为软骨发育的程序化研究提供实验基础。方法:无菌条件下取出新生SD大鼠关节软骨,分别采用Ⅱ型胶原蛋白酶单独消化法、胰蛋白酶和Ⅱ型胶原蛋白酶分步消化法分离软骨细胞,并进行体外培养。光学显微镜下观察软骨细的形态,CCK-8法检测软骨细胞的增殖活性,半定量免疫荧光分析软骨细胞的Ⅱ型胶原蛋白表达。结果与结论:(1)单独消化法和分步消化法都可以得到大量软骨细胞,但分步消化法较单独消化法所得软骨细胞的纯度更高;(2)光学显微镜下观察,两种方法消化所得细胞在形态学上无明显差异;(3)单独消化法所得细胞生长速度更快;(4)免疫荧光半定量分析显示两种方法所得软骨细胞Ⅱ型胶原蛋白表达一致;(5)以上结果表明,分步消化法更适于新生大鼠原代软骨细胞的分离培养。
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单位中山大学中山医学院; 中山大学附属第三医院; 中山大学附属第一医院
