甜瓜谷氨酰胺合成酶的亚细胞定位

作者：邓扬悟; 王黎敏; 张屹东; 陈怡; 黄丹枫

来源：上海交通大学学报(农业科学版), 2010, 28(05): 402-407.

DOI：10.3969/j.issn.1671-9964.2010.05.002

• 谷氨酰胺合成酶
• 亚细胞定位
• 黄色荧光蛋白(YFP)
• 激光扫描共聚焦显微技术
• 洋葱内表皮细胞

在一级结构上的差异,使得植物中胞质型(GS1)与质体型(GS2)谷氨酰胺合成酶(GS;EC 6.3.1.2)在生理水平上的作用及亚细胞结构中的定位不同。GS1通常定位于细胞质中,而GS2则多定位于细胞质体(叶绿体)中。为了对课题组从甜瓜(Cucumis melo L.)中克隆到的首个胞质型(M-GS1,GenBank登录号:DQ851867)及质体型(M-GS2,GenBank登录号:AY773090)GS基因的表达产物进行亚细胞定位,本研究在对其进行生物信息学分析和定位预测的基础上,通过将其各自的编码区分别与定位报告基因——黄色荧光蛋白YFP基因融合,构建重组植物表达载体(pA7-GS1-YFP和pA7-GS2-YFP),在基因枪轰击下转入洋葱内表皮细胞中瞬时表达,再用激光扫描共聚焦显微镜对各表达产物在洋葱内表皮细胞内的分布情况进行了观察和分析。2种手段分析结果均提示,M-GS1定位于细胞质中,而M-GS2则定位于细胞的质体中。对甜瓜谷氨酰胺合成酶进行精确亚细胞定位,为进一步探讨M-GS1和M-GS2在提高植物N素利用效率上的作用奠定了基础。

• 单位
  香港中文大学; 江西理工大学; 上海交通大学