重组人干扰素λ1在HEK-293F细胞中的表达及鉴定

作者：闫甲丽; 刘明杨; 刘建伟; 李素贞; 柳森; 王健^*

来源：中国生物制品学杂志, 2023, 36(08): 911-917.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.003959

• 重组人干扰素λ1
• HEK-293F细胞
• 信号肽
• 载体

目的 采用HEK-293F细胞瞬时转染表达重组人干扰素λ1(recombinant human interferonλ1,rhIFNλ1)，并进行鉴定。方法 通过2种信号肽[T细胞受体（T cell receptor,TCR）和天然信号肽（nature signal peptide,NSP）]、3种载体[pcDNA3.4、泛染色质开放原件（ubiquitous chromatin opening element,UCOE）、PFR]和目的基因rhIFNλ1构建6种信号肽-载体组合的重组质粒，以HEK-293F为宿主细胞，摇瓶规模瞬时转染表达rhIFNλ1。选择NSP及载体UCOE构建低糖基化rhIFNλ1重组质粒UCOE-Q46-λ，瞬时转染HEK-293F细胞,表达产物经阳离子交换层析（HiTrap SP FF）、蓝胶层析（HiTrap Blue HP）和分子筛凝胶过滤层析（Sephacryl S-100 HR）3步纯化，纯化产物进行Western blot及反相HPLC分析，并检测质谱分子量及N-末端氨基酸序列。结果 6种重组质粒经双酶切及测序鉴定，证明构建正确。随着转染时间的延长，6种表达产物的表达量逐渐增加，转染6 d时最高，达10～20 mg/L。低糖基化rhIFNλ1重组质粒UCOE-Q46-λ经双酶切及测序鉴定，证明构建正确。重组质粒UCOE-Q46-λ转染HEK-293F细胞6 d，细胞培养上清纯化产物的相对分子质量约27 800，纯度达97.372%，且可与小鼠抗人IL-29/IFNλ1单克隆抗体发生特异性结合；反相HPLC检测分析可见2个峰，出峰时间分别为15.6和20.0 min；质谱分子量约为24 000;N-末端5个氨基酸序列为G-P-V-P-T。结论 HEK-293F细胞表达的rhIFNλ1纯度较高，为该蛋白的进一步研究奠定了基础。