高密度脂蛋白通过Akt信号通路对氧糖剥离小鼠心肌细胞的保护作用研究

作者：鄂璐莎; 程颖; 赵兴胜^*

来源：中华危重病急救医学, 2018, 30(08): 795-799.

• 高密度脂蛋白
• 氧糖剥离
• 心肌细胞
• 清道夫受体-B1

目的探讨高密度脂蛋白(HDL)对氧糖剥离(OGD)小鼠心肌细胞的保护作用。方法通过蛋白酶消化及差速贴壁法获得原代清道夫受体B1基因敲除小鼠(SR-B1-/-)的心肌细胞与普通C57小鼠(SR-B1+/+)的心肌细胞。①将两种细胞均分为正常对照组(Con组)、OGD组、OGD+HDL组3组,培养4 h后用碘化丙啶(PI)染色测定细胞坏死情况。②将SR-B1+/+心肌细胞分为Con组、OGD组、OGD+HDL组、磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B (PI3K/Akt)抑制剂LY294002组4组,用PI染色测定细胞坏死情况;用原位末端缺刻标记法(TUNEL)测定细胞凋亡情况;按照试剂盒步骤测定细胞上清液中肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)含量;用蛋白质免疫印迹试验(WesternBlot)测定SR-B1、Akt蛋白表达。结果①在SR-B1+/+心肌细胞中,给予HDL可抑制OGD致细胞坏死;而HDL对OGD的SR-B1-/-心肌细胞无保护作用。②对SR-B1+/+细胞研究显示:与Con组比较,OGD组坏死细胞显著增多,细胞活性显著下降,上清液中LDH、CK-MB含量升高,磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、SR-B1表达显著下降。与OGD组比较,OGD+HDL组坏死细胞显著减少[PI阳性细胞率:(26.71±5.94)%比(64.24±18.34)%],细胞活性显著升高[(63.84±6.95)%比(26.71±5.13)%],上清液中LDH、CK-MB含量显著下降[LDH(U/L):896.3±161.5比1568.3±243.5, CK-MB(U/L):304.3±72.9比583.6±81.6],p-Akt、SR-B1表达显著升高(p-Akt/t-Akt:0.84±0.13比0.18±0.06, SR-B1/β-actin:1.23±0.19比0.09±0.02),差异均有统计学意义(均P<0.05)。与OGD+HDL组比较,LY294002组坏死细胞增多,细胞活性下降,上清液中LDH、CK-MB含量升高,p-Akt、SR-B1表达下降,且各指标与OGD组比较差异均无统计学意义。4组间细胞凋亡情况差异无统计学意义。结论 HDL对OGD小鼠心肌细胞具有保护作用,其机制可能与激活PI3K/Akt通路后上调SR-B1蛋白表达相关。

• 单位
  内蒙古自治区人民医院; 天津医科大学