致细胞病变型新疆BVDV基因2型毒株的分离鉴定及其致病性

作者：李祯; 郭妍婷; 陈俊贞; 胡新艳; 赵新艳; 董文丽; 贺渊秀; 王万顺; 李泽宇; 姚刚; 冉多良; 付强^*; 史慧君^*

来源：中国兽医学报, 2021, 41(04): 646-654.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2021.04.04

• 牛病毒性腹泻病毒
• 致细胞病变型
• 5′UTR基因
• 基因2型

为了解新疆博乐地区某牛场牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus, BVDV)的流行情况及致病性,采用反转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)检测粪便样品,将阳性病料接种至胎牛肾细胞(madin-darby bovine kidney, MDBK),盲传15代后通过5轮蚀斑纯化试验得到1株致细胞病变型(cytopathic type, CP)BVDV毒株;通过理化性质检测、间接免疫荧光试验、电镜观察、基因序列分析及小鼠致病性试验对该毒株进行鉴定。结果显示:成功分离纯化得到1株CP BVDV毒株,将其命名为BVDV-BL314株;盲传15代BVDV毒株接种至MDBK细胞培养引起明显的细胞皱缩、变圆、碎裂、脱落、产生合胞体等致细胞病变效应(cytopathogenic effect, CPE);测定该毒株的滴度为2×108 TCID50/0.1 mL;理化性质检测发现该病毒对乙醚、氯仿等有机溶剂敏感,对酸碱敏感;56℃处理30 min可显著性降低病毒活性;间接免疫荧光试验检测胞浆中可见特异性荧光;电镜观察该病毒呈球形,直径为40～60 nm;遗传进化分析显示该分离株与BVDV-125c株有较近的亲缘关系,属于BVDV-2a基因亚型;免疫BALB/c小鼠后,剖检表现为多器官肿大、出血、质地变脆,边缘钝圆,无光泽等症状;镜检可见炎性细胞浸润、出血等变化。结果表明,分离纯化得到1株致细胞病变型新疆地方性BVDV基因2型毒株,且具有较强的致病性,将为新疆BVDV流行病学调查及致病机制研究提供依据。

• 单位
  新疆农业大学