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摘要
目的探讨血红素氧合酶-1(HO-1)对大鼠肝移植缺血再灌注损伤后肝脏组织中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、VEGF的表达和肝内血管再生的影响。方法采用实验研究方法。240只大鼠按随机数字表法, 分为3组, 每组80只, 空病毒组大鼠转染空病毒, 诱导组大鼠转染HO-1过表达腺病毒, 抑制组大鼠转染HO-1 RNAi腺病毒。大鼠进行1∶1配对, 选取体质量较小者作为供体, 体质量较大者作为受体, 参照"二袖套"法大鼠肝移植模型行肝移植。供、受体大鼠均于手术前24 h经尾静脉注射腺病毒。(1)术前腺病毒转染效率检测:注射腺病毒后12、24 h, Western blot检测3组大鼠肝脏组织中HO-1的表达量。(2)肝移植术后受体大鼠肝功能检测:肝移植术后1、3、7、14 d检测3组受体大鼠肝功能指标(ALT、AST、ALP、GGT)。(3)肝移植术后受体大鼠肝组织病理形态学和损伤评分:术后1 d和14 d取受体大鼠肝脏组织制备成石蜡切片, HE染色观察, 并采用Suzuki损伤评分标准评价。(4)Western blot检测受体大鼠肝脏组织中HIF-1α、VEGF、HO-1相对蛋白表达量。(5)免疫荧光染色检测3组受体大鼠肝移植术后14 d肝脏组织中血管性血友病因子(vWF), 计数小血管数量。正态分布的计量资料以±s表示, 两组间比较采用独立样本的t检验, 多组间比较采用单因素方差分析, 两两比较采用LSD检验。结果 (1)术前腺病毒转染效率检测:空病毒组、诱导组和抑制组大鼠术前注射腺病毒12 h时肝脏组织中HO-1相对表达量分别为1.08±0.16、1.18±0.21、0.87±0.26, 24 h时分别为1.08±0.26、1.39±0.19、0.57±0.12, 3组不同时间点比较, 差异均有统计学意义(F=4.232, 36.513, P<0.05)。(2)肝移植术后受体大鼠肝功能情况:肝移植术后3 d空病毒组、诱导组和抑制组大鼠ALT分别为(504±67)U/L、(438±47)U/L、(490±39)U/L, 3组比较, 差异有统计学意义(F=3.517, P<0.05)。肝移植术后7d空病毒组、诱导组和抑制组大鼠ALT分别为(443±49)U/L、(382±49)U/L、(493±44)U/L, AST分别为(430±34)U/L、(372±50)U/L、(455±62)U/L, ALP分别为(455±38)U/L、(394±25)U/L、(470±72)U/L, 3组上述指标比较, 差异均有统计学意义(F=10.950, 5.667, 5.398, P<0.05)。肝移植术后14 d空病毒组、诱导组和抑制组大鼠ALT分别为(394±46)U/L、(283±47)U/L、(446±43)U/L, AST分别为(361±68)U/L、(288±60)U/L、(422±51)U/L, ALP分别为(417±17)U/L、(332±46)U/L、(423±63)U/L, GGT分别为(4.5±1.1)U/L、(2.5±0.5)U/L、(4.3±1.3)U/L, 3组上述指标比较, 差异均有统计学意义(F=26.906, 9.924, 8.013, 9.279, P<0.05)。(3)肝移植术后受体大鼠肝脏组织病理形态学和损伤评分:肝移植术后1 d空病毒组、诱导组和抑制组大鼠肝脏组织均见细胞肿胀, 胞质疏松, 汇管区见数量不等炎性细胞浸润。术后14 d空病毒组大鼠见汇管区仍有少量炎症细胞浸润, 肝细胞排列基本正常, 但稍显肿胀。诱导组大鼠见肝细胞肿胀较前减少、肝小叶结构基本正常。抑制组大鼠见肝细胞出现小片状、局灶性坏死, 汇管区大量炎症细胞浸润、胆管结构破坏。空病毒组、诱导组、抑制组受体大鼠肝移植术后1 d Suzuki损伤评分分别为(6.7±1.7)分、(6.1±1.2)分、(7.6±1.3)分, 3组比较, 差异无统计学意义(F=2.257, P>0.05)。术后14 d Suzuki损伤评分分别为(4.0±0.8)分、(2.9±0.8)分、(5.1±1.4)分, 3组比较, 差异有统计学意义(F=9.776, P<0.05)。(4)Western blot检测结果显示:空病毒组、诱导组和抑制组受体大鼠肝移植术后1d肝脏组织中相关蛋白的相对表达量:HIF-1α分别为0.21±0.10、0.23±0.09、0.17±0.06, VEGF(43 KD)分别为0.30±0.12、0.34±0.14、0.29±0.11, 3组上述指标比较, 差异均无统计学意义(F=0.902, 0.410, P>0.05);VEGF(24 KD)分别为1.21±0.25、2.13±0.40、0.91±0.22, HO-1分别为0.55±0.12、0.72±0.12、0.26±0.07, 3组上述指标比较, 差异均有统计学意义(F=35.158, 39.082, P<0.05)。空病毒组、诱导组和抑制组受体大鼠肝移植术后7 d肝脏组织中相关蛋白的相对表达量:HIF-1α分别为0.49±0.22、0.83±0.26、0.24±0.09, VEGF(43 KD)分别为0.46±0.13、0.63±0.19、0.30±0.12, VEGF(24 KD)分别为0.98±0.37、1.60±0.33、0.64±0.18, HO-1分别为0.98±0.37、1.49±0.46、0.75±0.26, 3组上述指标比较, 差异均有统计学意义(F=16.853, 10.021, 20.756, 8.156, P<0.05)。(5)免疫荧光染色检测结果显示:空病毒组、诱导组、抑制组大鼠肝移植术后14 d小血管数量分别为(7.9±2.0)条、(10.6±1.9)条、(7.6±1.9)条, 3组比较, 差异有统计学意义(F=5.921, P<0.05)。结论 HO-1能够促进大鼠肝移植缺血再灌注损伤后肝脏组织中HIF-1α和VEGF表达并增加肝内血管再生, 明显减轻肝移植术后胆道缺血再灌注损伤。
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单位昆明医科大学第一附属医院; 第三军医大学西南医院
