蛋白磷酸酶2Cα介导高糖诱导的eNOS Ser1177磷酸化下调并导致人脐静脉内皮细胞功能障碍

作者：张俊诗; 梁政伟; 丁菁; 柴鑫; 吕莎; 张倩; 邓亚竹; 陆德琴^*

来源：中国病理生理杂志, 2023, 39(06): 973-981.

• 高糖
• 蛋白磷酸酶2Cα
• 内皮型一氧化氮合酶
• 磷酸化
• 内皮功能障碍

目的：探讨蛋白磷酸酶2Cα(PP2Cα)在高糖（HG）诱导的内皮型一氧化氮合酶（eNOS） Ser1177磷酸化水平下调导致内皮功能障碍中的作用及机制。方法：采用HG(11、22、33和44 mmol/L葡萄糖)处理人脐静脉内皮细胞（HUVECs）的方法建立HG损伤体外模型，并设立正常葡萄糖（NG; 5.5 mmol/L葡萄糖）组和甘露醇组作为对照。用PP2Cα特异性抑制剂血根碱（San; 1μmol/L）预处理细胞1 h和细胞内转染PP2Cα小干扰RNA(si-PP2Cα)的方法抑制PP2Cα活性。Western blot检测PP2Cα、eNOS、p-eNOS (Ser1177)、AMP活化蛋白激酶（AMPK）和pAMPK (Thr172)蛋白水平。DAF-FM DA荧光探针检测细胞内一氧化氮（NO）含量。细胞划痕实验检测细胞迁移能力。免疫共沉淀和GST-pull down实验检测PP2Cα蛋白与eNOS和AMPK蛋白之间的相互作用。结果：与NG组比较，从22 mmol/L开始，p-eNOS (Ser1177)水平随着葡萄糖浓度增加而显著降低（P<0.05），从36 h开始，随着高浓度葡萄糖刺激时间延长而显著降低（P<0.05）；各组间eNOS总蛋白表达无显著差异。与NG组比较，San预处理可显著逆转HG诱导的p-eNOS (Ser1177)水平降低和NO生成减少（P<0.05），并改善细胞迁移能力（P<0.05）。与si-Con组相比，si-PP2Cα组PP2Cα水平显著降低（P<0.05），同时p-eNOS (Ser1177)水平显著升高（P<0.05）。San预处理和转染si-PP2Cα均可显著逆转HG诱导的p-AMPK (Thr172)水平降低（P<0.05），且p-AMPK (Thr172)和p-eNOS(Ser1177)水平的变化呈显著正相关（r=0.968 4, r=0.993 8，均P<0.05）。免疫共沉淀和GST-pull down实验证实PP2Cα蛋白与eNOS和AMPK蛋白之间存在相互作用。结论：HG可能通过激活PP2Cα抑制AMPK磷酸化，继而下调p-eNOS (Ser1177)水平，从而导致内皮功能障碍。

• 单位
  基础医学院; 贵州医科大学