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摘要
为了建立一种快速、高效检验猪肝样品中猪戊型肝炎病毒(HEV)污染情况的新方法,即HEV实时荧光逆转录-重组酶聚合酶扩增(RT-qRPA)检测方法。参考TwistDx公司RPA技术说明,以基因4型猪HEV分离株的保守基因序列为模板设计合成特异性引物和EXO探针建立HEV RT-qRPA检测方法。以HEV国际检测金标准RT-qPCR方法为参照,对新建立的RT-qRPA检测方法的特异性、敏感性及可重复性进行对比验证评价,进一步通过对锦州市猪肝样品中HEV的污染情况进行对比检测分析,评估RT-qRPA检测方法的临床可靠性。结果显示,本研究所建立的RT-qRPA检测方法在39℃恒温条件下20 min即可检出阳性值,且特异性强、敏感性高,HEV RNA的最低检测限约17.7拷贝,与RT-qPCR标准参考方法相同。148份猪肝脏样品中HEV的阳性检出率为0.8%(1/148),与RT-qPCR方法的检出结果一致。本研究成功建立了HEV RT-qRPA检测方法,该方法敏感性高、特异性好、操作简单、反应快速,为下一步开发POCT便携检测设备应用于我国畜牧兽医基层工作的HEV检测提供了技术参考。
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