人端粒酶催化亚单位(hTERT)反义分子探针细胞摄取动力学与生物学性质

作者：王荣福; 刘萌; 张春丽; 闫平; 于明明

来源：北京大学学报(医学版), 2009, 41(04): 437-441.

DOI：10.3969/j.issn.1671-167X.2009.04.013

• 分子探针
• 端粒,末端转移酶
• 脂质体
• 细胞,培养的

目的:研究人端粒酶催化亚单位(hTERT)反义分子探针(99mTc-hTERT ASON)在体外靶细胞摄取动力学情况,以及特异识别靶基因的生物学性质。方法:以双功能螯合剂法,制备放射性核素99mTc标记的针对hTERT mRNA的反义分子探针(99mTc-hTERTASON)。培养hTERT表达阳性的人肝细胞癌细胞株(HepG2细胞)。观察在有/无脂质体介导下,细胞对99mTc-hTERT ASON的摄取动力学情况。阳离子脂质体介导99mTc-hTERTASON转染细胞,逆转录聚合酶链反应(reverse transcriptase polymerase chain reaction,RT-PCR)分析其特异识别靶基因的生物学活性。结果:99mTc-hTERT ASON的标记率达到(76±5)%(n=5),放射性化学纯度达到96%,比活度为1.850×106Bq/μg。不论脂质体介导与否,99mTc-hTERT ASON在不同时相的细胞摄取率均高于对照组(P<0.05);脂质体明显提高细胞对99mTc-hTERT ASON的摄取(P<0.05);通过脂质体介导,细胞对99mTc-hTERT ASON的摄取高峰值提前至2h,并保持稳定水平至3h。RT-PCR结果显示99mTc-hTERT ASON转染细胞后,hTERT mRNA表达量明显降低。结论:脂质体在体外能有效提高99mTc-hTERT ASON的细胞摄取率。分子探针99mTc-hTERT ASON能特异识别靶基因。为进一步开展99mTc-hTERT ASON体内研究奠定了基础。

• 单位
  北京大学第一医院; 北京师范大学