芒果苷抗DHAV-1致鸭胚肝细胞炎性损伤的研究

作者：孙伟翔; 秦枫; 袁亚梅; 卜潇; 张力; 吴双; 林梦舟; 吴植; 朱善元^*

来源：中国畜牧兽医, 2022, 49(11): 4485-4494.

DOI：10.16431/j.cnki.1671-7236.2022.11.040

• 芒果苷
• 鸭甲型肝炎病毒1型(DHAV-1)
• 鸭胚肝细胞
• 鸭外周血单个核细胞

【目的】探究芒果苷(mangiferin, Man)对鸭甲型肝炎病毒1型(Duck hepatitis A virus-1,DHAV-1)致鸭胚肝细胞(DEHCs)炎性损伤的影响。【方法】从14日龄SPF级麻鸭鸭胚肝脏组织分离原代DEHCs,用含不同浓度芒果苷(0、5、10、20、40、80和160μmol/L)的培养液培养48 h后，通过CCK-8法检测其安全浓度范围；用安全浓度的芒果苷培养DEHCs 12、24和48 h后，检测培养液上清中乳酸脱氢酶(LDH)的活力，判定芒果苷对DEHCs的毒性作用。将DEHCs分为对照组(Mock)、模型组(Model)、芒果苷组(Man10、Man20和Man40)和利巴韦林组(Rib),每组3个重复，所有组细胞血清饥饿培养12 h后，Mock组加入含10%胎牛血清(FBS)的DMEM培养基，Model、Man10、Man20、Man40和Rib组用DHAV-1(MOI=1.0)攻毒2 h后，Model组更换为含10%FBS的DMEM培养基，Man10、Man20、Man40培养基中分别添加10、20和40μmol/L芒果苷，Rib组添加1μmol/L利巴韦林。48 h后收集各组细胞，用比色法检测丙二醛(MDA)含量及过氧化氢酶(CAT)、总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、总一氧化氮合酶(T-NOS)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性；免疫荧光(IF)法检测DHAV-1在各组DEHCs中的分布情况；Western blotting法检测NLRP3/Pro-Caspase1/IL-1β通路蛋白的表达情况。提取2日龄SPF麻鸭的新鲜全血，分离鸭外周血单个核细胞(duPBMCs),duPBMCs分组及处理同DEHCs, ELISA法检测各组duPBMCs上清液中白介素8(IL-8)和IL-1β的含量。【结果】与0μmol/L芒果苷组相比，80和160μmol/L芒果苷组细胞的增殖能力显著降低(P<0.05),因此5～40μmol/L芒果苷为处理DEHCs的安全给药浓度。20和40μmol/L芒果苷处理48 h细胞上清液中LDH活力显著低于处理12和24 h(P<0.05),20和40μmol/L芒果苷处理12和24 h细胞上清液中LDH活力显著高于5和10μmol/L芒果苷处理(P<0.05),各浓度芒果苷处理48 h细胞上清液中LDH活力均差异不显著(P>0.05),故48 h为最适处理时间。与Mock组相比，Model组DEHCs中CAT、T-AOC、SOD和GSH-Px活性均显著降低(P<0.05),DEHCs中MDA含量、T-NOS活性、DHAV-1拷贝数、DHAV-1阳性率、NLRP3表达量及duPBMCs中IL-8、IL-1β分泌量均显著升高(P<0.05)。与Model组相比，Man10、Man20和Man40组DEHCs中CAT、T-AOC、SOD和GSH-Px活性均显著提高(P<0.05),DEHCs中MDA含量、T-NOS活性、DHAV-1拷贝数、DHAV-1阳性率、NLRP3表达量及duPBMCs中IL-8、IL-1β分泌量均显著降低(P<0.05)。【结论】芒果苷可通过增加抗氧化能力、降低DHAV-1的复制水平、抑制NLRP3通路的激活、降低促炎细胞因子的释放抗DHAV-1感染DEHCs造成的炎性损伤。

• 单位
  扬州大学; 江苏农牧科技职业学院; 江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室