结核分枝杆菌重组抗原Rv0350的克隆表达和血清学评价

作者：余琴; 林楠; 赵平; 刘英杰; 万康林

来源：中国卫生检验杂志, 2015, 25(09): 1307-1310.

• 结核分枝杆菌
• Rv0350
• 酶联免疫吸附试验
• 受试者工作特征曲线

目的对结核分枝杆菌重组抗原Rv0350基因进行克隆表达和纯化,并对其抗原性进行评价,分析此种抗原的应用价值。方法以结核分枝杆菌标准株H37Rv菌株基因组为模板,PCR扩增Rv0350基因片段,产物经验证后与载体质粒p ET-32a构建重组质粒,转化入表达宿主E.coli BL21(DE3)菌株内,蛋白诱导纯化后基于酶联免疫吸附试验(ELISA),使用重组结核抗原Rv0350对183份血清进行检测。运用受试者工作特征曲线法计算抗原的最佳临界值(cut-off值),并计算该抗原的灵敏度、特异度曲线下面积(AUC)和诊断效率,对其诊断能力和应用价值进行综合评价。结果经PCR扩增后的Rv0350基因片段电泳结果与目的基因相符,抗原诱导表达最佳时间为4 h,纯化蛋白与预期结果相同,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测结果表明,该蛋白的灵敏度为75.3%,特异度为80.0%,诊断效率为77.6%,Yuden指数为0.553,AUC为0.828。结论结核分枝杆菌重组抗原Rv0350具有良好的诊断灵敏度,有一定的临床应用价值。

• 单位
  北京市朝阳区疾病预防控制中心; 传染病预防控制国家重点实验室; 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所