慢病毒载体介导短发夹RNA沉默Ppif基因对大鼠肾细胞的影响

作者：胡威; 刘修恒; 祝恒成; 吕胜启; 陈晖; 刘廷; 陈志强

来源：中华实验外科杂志, 2014, 31(02): 356-358.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1001-9030.2014.02.048

• 肾细胞
• 慢病毒载体
• Ppif基因
• 短发卡RNA
• 基因沉默

目的构建干扰Ppif基因的重组U6慢病毒质粒,观察内源性小干扰RNA(siRNA)的效果。方法根据siRNA设计原则,设计合成短发卡RNA(shRNA),用于体内转录合成干扰Ppif编码序列的发夹RNA。连接、筛选、酶切,鉴定Pgcl-GFP/U6 Ppif shRNA;以含无关序列发夹结构的质粒载体为对照,感染大鼠肾细胞株,采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和Western blot检测mRNA和蛋白表达水平与对照组的差异。结果测序证实重组质粒构建成功,体外试验表明,Ppif基因的mRNA和蛋白表达均一致降低[(0.582±0.014)%],与阴性对照组[(0.946±0.018)%]和空白对照组[(0.893±0.021)%]比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论慢病毒介导的Ppif-shRNA成功在体外敲减了大鼠肾细胞的目的蛋白表达,影响了肾缺血再灌注的发生与发展。

• 单位
  华中科技大学同济医学院附属同济医院; 武汉大学人民医院