SUMO蛋白酶的发酵和纯化工艺的研究

作者：冯秀萍; 杜柏榕; 闫东梅; 赵向峰; 朱迅

来源：中国生物工程杂志, 2009, 29(02): 81-86.

DOI：10.13523/j.cb.20090214

• SUMO蛋白酶(UlP1)
• 发酵优化
• 离子交换层析

目前,小分子肽多需要进行融合表达,虽然有GST标签等表达体系,但是表达产物切割时仍留有多余氨基酸,影响小分子肽的功能;SUMO蛋白酶对SUMO融合表达系统表达的重组蛋白进行切割时没有多余氨基酸残留,因此成为蛋白切割工具的热点。利用基因工程技术构建重组His-Ulp1/pET3c/BL21(DE3)工程菌株,用摇瓶优化表达条件,摸索高密度发酵工艺和不同层析纯化工艺条件。结果表明,经1.0mmol/L的IPTG30℃诱导表达6h,表达效果最好。罐发酵后菌体SDS-PAGE分析表达量可达24.39%,通过CMSepharose Fast Flow阳离子交换一步层析可获得纯度大于98%的SUMO蛋白酶,每升发酵液可获得355mg的SUMO蛋白酶纯品。Western blot分析表明,UlP1能与6×His抗体产生免疫反应。为日后大规模产业化生产奠定了基础。

• 单位
  吉林大学白求恩医学院