泽泻汤抑制肝细胞铁死亡改善非酒精性脂肪性肝病的作用机制

作者：李二稳; 高改; 王梦瑶; 吴丽敏; 谢治深; 张振强; 王辉; 徐江雁^*

来源：中医学报, 2022, 37(06): 1243-1253.

DOI：10.16368/j.issn.1674-8999.2022.06.229

• 非酒精性脂肪性肝病
• 泽泻汤
• 氧化应激
• 铁死亡
• Nrf2
• 小鼠

目的：探讨泽泻汤(zexie tang, ZXT)抑制肝细胞铁死亡改善非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease, NAFLD)的作用机制。方法：50只SPF级雄性C57BL/6J小鼠随机分为空白对照组、模型组及泽泻汤低(1.3 g·kg-1)、中(2.6 g·kg-1)、高(5.2 g·kg-1)剂量组，每组10只。除空白对照组，其余组小鼠均采用高脂饮食喂养建立NAFLD模型，同时各组灌胃给予10 mL·kg-1相应药物，空白对照组和模型组灌胃等体积的0.5%羧甲基纤维素钠，每天1次，连续9周。免疫组化法检测小鼠肝脏中血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)、谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)、铁死亡抑制蛋白1(ferroptosis suppressor protein 1,FSP1)的蛋白表达水平；RT-PCR法检测小鼠肝脏FSP1、CoQ10、Nrf2及下游抗氧化基因的mRNA表达水平；硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid, TBA)法检测小鼠肝脏丙二醛(malondialdehyde, MDA)的水平；比色法检测小鼠肝脏还原型谷胱甘肽(reduced glutathione, GSH)的含量；荧光显微镜观察活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平。选择Huh-7细胞及HEK-293T细胞，分为空白组、模型组、特丁基对苯二酚(tert-butylhydro quinone, t-BHQ)组及泽泻汤不同质量浓度(0.25 g·L-1、0.5 g·L-1、0.75 g·L-1、1 g·L-1)组，MTT法检测细胞存活率；mitoSOX探针检测线粒体超氧化物含量；荧光素酶报告基因法检测核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)-抗氧化反应元件(antioxidant response element, ARE)的转录活性；RT-PCR法检测FSP1、CoQ10、ACSL4、Nrf2及其下游基因的mRNA表达水平；Western Blot法检测胞浆及核Nrf2蛋白表达水平。结果：ZXT可显著升高FSP1蛋白表达水平(P<0.05),显著升高FSP1 mRNA、Coq10 mRNA、Nrf2 mRNA及其下游抗氧化基因HO-1 mRNA、GPX4 mRNA、GSS mRNA、GCL mRNA、UGT mRNA、GST mRNA的表达水平(P<0.05),剂量依赖性上调Nrf2核蛋白表达量及Nrf2-ARE的转录活性(P<0.05),显著降低ACSL4 mRNA的表达水平及线粒体超氧化物水平(P<0.001),显著降低ROS、MDA水平(P<0.05),显著升高HO-1、GPX4、GSH的水平(P<0.001)。结论：泽泻汤可抑制肝细胞铁死亡改善NAFLD,其作用机制可能与激活Nrf2有关。

• 单位
  河南中医药大学