摘要
目的:探讨泽泻汤(zexie tang, ZXT)抑制肝细胞铁死亡改善非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease, NAFLD)的作用机制。方法:50只SPF级雄性C57BL/6J小鼠随机分为空白对照组、模型组及泽泻汤低(1.3 g·kg-1)、中(2.6 g·kg-1)、高(5.2 g·kg-1)剂量组,每组10只。除空白对照组,其余组小鼠均采用高脂饮食喂养建立NAFLD模型,同时各组灌胃给予10 mL·kg-1相应药物,空白对照组和模型组灌胃等体积的0.5%羧甲基纤维素钠,每天1次,连续9周。免疫组化法检测小鼠肝脏中血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)、谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)、铁死亡抑制蛋白1(ferroptosis suppressor protein 1,FSP1)的蛋白表达水平;RT-PCR法检测小鼠肝脏FSP1、CoQ10、Nrf2及下游抗氧化基因的mRNA表达水平;硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid, TBA)法检测小鼠肝脏丙二醛(malondialdehyde, MDA)的水平;比色法检测小鼠肝脏还原型谷胱甘肽(reduced glutathione, GSH)的含量;荧光显微镜观察活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平。选择Huh-7细胞及HEK-293T细胞,分为空白组、模型组、特丁基对苯二酚(tert-butylhydro quinone, t-BHQ)组及泽泻汤不同质量浓度(0.25 g·L-1、0.5 g·L-1、0.75 g·L-1、1 g·L-1)组,MTT法检测细胞存活率;mitoSOX探针检测线粒体超氧化物含量;荧光素酶报告基因法检测核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)-抗氧化反应元件(antioxidant response element, ARE)的转录活性;RT-PCR法检测FSP1、CoQ10、ACSL4、Nrf2及其下游基因的mRNA表达水平;Western Blot法检测胞浆及核Nrf2蛋白表达水平。结果:ZXT可显著升高FSP1蛋白表达水平(P<0.05),显著升高FSP1 mRNA、Coq10 mRNA、Nrf2 mRNA及其下游抗氧化基因HO-1 mRNA、GPX4 mRNA、GSS mRNA、GCL mRNA、UGT mRNA、GST mRNA的表达水平(P<0.05),剂量依赖性上调Nrf2核蛋白表达量及Nrf2-ARE的转录活性(P<0.05),显著降低ACSL4 mRNA的表达水平及线粒体超氧化物水平(P<0.001),显著降低ROS、MDA水平(P<0.05),显著升高HO-1、GPX4、GSH的水平(P<0.001)。结论:泽泻汤可抑制肝细胞铁死亡改善NAFLD,其作用机制可能与激活Nrf2有关。
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