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摘要
硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)作为新的气体信号分子参与多系统生理及病理生理功能的调节,并受到学术界广泛关注。但迄今为止,血液中H2S浓度的检测依旧是本领域的一大难题。本文旨在建立一种简易的改良亚甲基蓝分光光度计法,提高亚甲基蓝法检测H2S浓度的敏感性。亚甲基蓝法测定血浆H2S时,大量血浆蛋白会影响测定结果。本方法先加入过量醋酸锌溶液使血浆中游离H2S、HS、S2形成ZnS沉淀,并使血浆蛋白变性析出;加入5mol/L NaOH强碱溶解变性的蛋白,而ZnS沉淀不溶于强碱;离心去除大量蛋白质;再加入0.2%N,N-二甲基对苯二胺盐酸盐溶液使ZnS完全溶解,用三氯乙酸沉淀剩余蛋白质,最后用分光光度计法测定H2S浓度。结果显示,各种离子甚至硫酸根离子以及硫代硫酸根离子不影响该方法检测的特异性。而向样本中添加4.5%白蛋白可降低检测数值,表明H2S与蛋白质结合影响本方法的检测,而且该方法不能检测全部与蛋白结合的H2S。该方法回收率为81.9%,表明该方法的精确度基本达到要求。利用该方法检测到65名健康志愿者的冻存血浆样本H2S浓度为(13.93±4.98)μmol/L,且SD大鼠新鲜和冻存后血浆H2S浓度之间没有明显差异。本方法能够较为准确地检测血浆中H2S的含量,具有稳定性好,灵敏度高,操作简单,需要样本少,可实现高通量等优点,能够用于临床及基础研究中血浆H2S的检测。
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单位北京大学第一医院
