Ag85 A-CD226 DNA 疫苗的制备及对小鼠免疫功能的影响

作者：李岩; 王大南; 杨芳莉; 朱俊丰; 桑力轩; 孙逊; 李胜军; 吕昌龙

来源：中华微生物学和免疫学杂志, 2014, (3): 235-240.

DOI：10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2014.03.016

• Ag85A
• CD226
• DNA疫苗
• 免疫功能

目的：构建pcDNA3．1-Ag85A-CD226真核表达质粒，制备Ag85A-CD226 DNA疫苗，经灌胃接种并观察该疫苗对小鼠免疫功能的影响。方法采用PCR方法从CD226-PCR2．1-ToPo质粒扩增CD226基因，与pcDNA3．1-Ag85A质粒连接，构建pcDNA3．1-Ag85A-CD226真核表达质粒，经脂质体转染法瞬时转染HEK293细胞株，采用RT-PCR、Western blot、免疫荧光方法检测Ag85A-CD226基因在该细胞内的表达。进一步提取纯化pcDNA3．1-Ag85 A-CD226重组质粒，用脂质体包裹制成Ag85 A-CD226 DNA疫苗。经灌胃Ag85 A-CD226 DNA疫苗接种于小鼠，乳酸脱氢酶释放法检测NK细胞杀伤活性，ELISA法检测脾细胞培养上清细胞因子分泌水平，real-time PCR法检测肠黏膜组织内细胞因子表达水平。结果成功构建真核细胞内表达pcDNA3．1-Ag85A-CD226重组质粒，并且转染HEK293细胞株检测到Ag85 A-CD226融合蛋白分子的表达。接种Ag85 A-CD226 DNA疫苗的小鼠较对照组小鼠NK细胞杀伤活性显著升高（ P＜0．01）；脾细胞培养上清中TNF-α、IFN-γ和IL-2的分泌水平显著增高（P＜0．01），而IL-4分泌水平显著降低（P＜0．01）；肠黏膜组织内TNF-α、IFN-γ和IL-2的表达水平显著升高（P＜0．01），而IL-4表达水平未见有统计学差异（P＞0．05）。结论 Ag85A-CD226 DNA疫苗经灌胃接种可诱导小鼠全身和肠道局部Th1型免疫应答增强，其效果强于单独应用Ag85 A或CD226 DNA疫苗。

• 单位
  辽宁卫生职业技术学院; 中国医科大学; 基础医学院