Netrin-1对T-ALL细胞中VEGFA表达的影响及相关机制研究

作者：朱瑶; 刘海燕; 相燕; 杨晖; 姚新原; 安曦洲; 张凯楠; 黄兰; 梁绍燕; 于洁^*

来源：中国实验血液学杂志, 2022, 30(04): 1049-1055.

DOI：10.19746/j.cnki.issn1009-2137.2022.04.012

• Netrin-1
• 血管内皮生长因子A
• Akt/mTOR
• 急性T淋巴细胞白血病

目的：探讨Netrin-1对急性T淋巴细胞白血病（T Cell Acute Lymphoblastic Leukemia,T-ALL）细胞中VEGFA水平的影响及可能的作用机制。方法：采用ELISA法检测10例T-ALL患儿和23例非恶性血液系统疾病患儿骨髓中Netrin-1、VEGFA的水平并进行比较，分析疾病组和对照组患儿骨髓中Netrin-1与VEGFA水平的相关性。体外培养T-ALL细胞株Jurkat、Molt-4，用不同浓度的Netrin-1(0,25,50,100 ng/ml)处理细胞24 h后，qRT-PCR及Western blot检测不同浓度下各细胞中VEGFA的表达量；qRT-PCR检测两种细胞中Netrin-1受体的表达，并采用co-IP检测Netrin-1与T-ALL细胞中受体的结合；Western blot检测各组细胞中Akt-mTOR通路中关键蛋白的磷酸化水平。使用Akt/mTOR抑制剂与Netrin-1(100 ng/ml)联合处理T-ALL细胞后，采用Western blot检测各组细胞中VEGFA的表达量以及Akt/mTOR通路中关键分子的磷酸化水平。结果：T-ALL患儿骨髓中Netrin-1及VEGFA表达水平显著高于对照组（P<0.05），且在T-ALL患者中两者表达水平呈线性相关（r2=0.974）。随着Netrin-1浓度的升高，VEGFA的表达水平也升高（P<0.05）。当Netrin-1浓度为100 ng/ml时，Netrin-1与Integrin-β4受体结合。Netrin-1浓度为100 ng/ml处理细胞24 h后，Akt、mTOR通路关键分子的磷酸化水平均提高；当Netrin-1(100 ng/ml)与Akt抑制剂联合处理T-ALL细胞后，VEGFA的表达量下降，Akt、mTOR的磷酸化水平也下降；而与mTOR抑制剂联合处理细胞后，Akt的磷酸化水平升高，mTOR的磷酸化水平降低，VEGFA的表达量也下降。结论：T-ALL患儿骨髓中Netrin-1及VEGFA表达量存在异常且两者存在线性关系；Netrin-1通过Integrin-β4受体，激活Akt/mTOR通路诱导T-ALL细胞表达VEGFA。

• 单位
  重庆医科大学附属儿童医院