蓝果忍冬离体茎尖小滴玻璃化超低温保存体系优化

作者：梁杉; 张志东; 刘海广; 陈丽; 李亚东; 李金英

来源：吉林农业大学学报, 2021, 1-10.

• 蓝果忍冬
• 离体培养
• 超低温保存
• 小滴玻璃化

试验以‘落火炭’试管苗为材料建立了蓝果忍冬茎尖的小滴玻璃化法超低温保存体系，并用5个基因型对该方法进行了验证。参数优化研究的结果显示：从4周苗龄试管苗上截取长约1.5 cm带有顶芽的茎段，在4℃黑暗条件下炼苗15 d；剥取的2～3 mm长的顶芽茎尖在预培养基（MS + 0.5 mol/L 蔗糖 + 6.5 g/L琼脂）上培养2 d [（25 ± 2）℃，黑暗]；将茎尖放入加载液（MS+ 2.0 mol/L 甘油 + 0.4 mol/L蔗糖）中处理40 min（室温），之后，用植物玻璃化保护溶液PVS2处理40 min（0℃）；茎尖转移到在铝箔条上用PVS2制好的小滴中（0℃），并迅速投入液氮（LN）中保存1 h；从LN中取出的材料迅速放入卸载液（MS + 1.2 mol/L 蔗糖）中处理30 min（室温）。最后将茎尖置于再生培养基（MS + 1.0 mg/L 6-BA + 0.3 mg/L IBA + 30 g/L蔗糖 + 6.5 g/L琼脂）上，黑暗培养5 d（25 ± 2）℃后转入正常温度和光照条件下培养。5个基因型的茎尖超低温保存后的平均再生率为44.7% ± 5.0%，最高再生率达到55% ± 5.4%。该研究首次报道了蓝果忍冬种质资源的小滴玻璃化超低温保存规程。

• 单位
  吉林农业大学