生殖道病原菌LAMP检测的环引物设计与优化

作者：贾义国; 徐小芳; 陈尚贤; 王新博; 余跃; 孙群^*

来源：中国测试, 2023, 49(11): 60-67.

• 病原菌检测
• 环引物
• 环介导等温扩增
• 生殖道感染
• 快速检测

孕期生殖道病原菌感染是威胁妇女和胎儿健康的常见疾病之一，为改进现有检测方法耗时长的缺陷，对基于环介导等温扩增（loop mediated isothermal amplification,LAMP）的生殖道病原菌快速检测方法进行优化。在Gardnerella vaginalis的LAMP检测体系中，通过对不同环引物组扩增速率（Ct值）进行统计学分析，验证了环引物在LAMP反应中提升扩增速率的能力，同时探究了环引物长度和GC含量对扩增速率的影响，并将其作为环引物筛选参数应用于3种生殖道病原菌（G. vaginalis、Streptococcus agalactiae、Enterococcus faecalis）检测的环引物设计。结果表明，不同GC含量的环引物扩增速率差异不显著，而环引物的长度是影响其扩增效果的关键因素，碱基数较少的环引物有利于提高LAMP反应速率（p<0.05），设计出的引物组GV-1、GBS-132和EF-3可以在105 CFU/mL扩增浓度下在30 min内呈现完整“S”扩增曲线，具有较好的临床病原菌筛查应用潜力。

• 单位
  生命科学学院; 生物资源与生态环境教育部重点实验室; 四川大学