慢病毒介导NGF过表达转染促进骨髓间充质干细胞向神经细胞转化的研究

作者：邓明; 谢萍; 马永刚; 明江华^*; 周炎; 陈庆; 刘志勇; 刘世清

来源：中国临床研究, 2019, 32(02): 145-149.

DOI：10.13429/j.cnki.cjcr.2019.02.001

• 神经生长因子
• 骨髓间充质干细胞
• 慢病毒转染
• 胶质纤维酸性蛋白
• 神经元特异性烯醇化酶

目的探究慢病毒介导神经生长因子(NGF)过表达转染促进骨髓间充质干细胞(BMSCs)向神经细胞转化的作用。方法体外分离,培养人BMSCs,利用基因过表达技术,构建NGF过表达慢病毒载体转染BMSCs。根据转染情况分成3组,空白对照组(未转染慢病毒载体的BMSCs)、空白载体病毒组(转染不含NGF过表达慢病毒载体的BMSCs)和过表达载体病毒组(转染过表达NGF慢病毒载体的BMSCs)。利用流式细胞仪检测BMSCs的表面标记物,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot分别检测神经细胞表面蛋白胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和神经元特异性烯醇化酶(NSE) mRNA及蛋白的表达。结果 (1) BMSCs的表面蛋白标记物CD44和CD29在第2代BMSCs的表达为60. 2%和58. 3%,CD34和CD45在第2代BMSCs的表达为3. 4%和2. 6%。(2)慢病毒转染效率为90%以上。转染效率较高。(3)空白对照组、空白载体病毒组和过表达载体病毒组的GFAP和NSE mRNA的相对表达量三组比较有统计学差异(P <0. 05);其中空白载体病毒组和空白对照组的组间比较无统计学差异(P> 0. 05);过表达载体病毒组高于空白载体病毒组,组间比较有统计学差异(P <0. 05)。Western blot检测蛋白表达量也具有同样的表达特点。结论慢病毒介导NGF过表达转染促进BMSCs可以提高BMSCs向神经细胞转化的效率,可以为神经损伤和脊髓损伤提供种子细胞。

• 单位
  武汉大学人民医院; 武汉市第三医院