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摘要
拟制备针对鸡传染性贫血病毒(CIAV)VP2蛋白的单克隆抗体(mAb),为CIAV的诊断和病毒生物学特性研究提供有用制剂。以PCR技术扩增CIAV VP2基因并克隆到原核表达载体pET-32a中，经IPTG诱导表达。以原核表达的融合蛋白免疫BALB/c小鼠，利用杂交瘤技术研制并筛选分泌抗CIAV VP2蛋白mAb的阳性杂交瘤细胞；采用截短表达CIAV VP2基因方法鉴定mAb识别的抗原表位。结果显示：成功获得了1株能稳定分泌抗CIAV VP2蛋白mAb的杂交瘤细胞株，并命名为CIAV-VP2-4A12;亚类鉴定结果表明，该mAb重链为IgG1型，轻链为kappa链；Western blot结果显示，该mAb可以识别大肠杆菌，Sf9细胞和转染pCAGGS-VP2-Flag的DF1细胞中表达的VP2蛋白。使用原核表达截短蛋白进行表位鉴定，发现该mAb识别抗原表位序列是155KTVRW159,序列比对发现该表位在CIAV中高度保守。本研究成功制备了针对CIAV VP2蛋白的特异性mAb,并精确鉴定了其识别表位，为VP2蛋白功能的研究以及CIAV的诊断方法研发提供了有效工具。
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