成体人肝源性干细胞外泌体对刀豆蛋白A诱导的小鼠急性肝损伤的作用

作者：韩鲁祥; 唐慧昕; 赵振峰; 李珊珊; 王全义; 孔令斌; 毕慧莹; 舒振峰; 段钟平; 陈煜; 洪丰^*

来源：临床肝胆病杂志, 2022, 38(05): 1101-1105.

DOI：10.3969/j.issn.1001-5256.2022.05.024

• 肝功能衰竭,急性
• 干细胞
• 外泌体
• 伴刀豆球蛋白A

目的 探讨成体人肝源性干细胞外泌体(HLSC-exo)不同时间静脉注射对刀豆蛋白A(ConA)诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用。方法 差速离心法提取HLSC-exo, Western blot检测其标志蛋白CD9、CD63的表达，纳米颗粒跟踪分析粒径分布。将56只C57BL/6雄性小鼠随机分为3组，空白对照组、ConA模型组和HLSC-exo治疗组。根据给予磷酸盐缓冲液或HLSC-exo后再注射ConA间隔时间不同，分为3 h、6 h、12 h亚组；检测血清中ALT、AST、TNFα、IL-10水平；比较各组小鼠肝脏大体形态及病理组织变化。计量资料多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD-t检验。结果 HLSC-exo是直径为90～110 nm的囊泡体，电镜下可见清晰的“茶托样”结构，其特异性标志蛋白CD9和CD63均有明显的表达；空白对照组小鼠ALT、AST水平分别为(31.81±6.74)U/L、(69.75±8.30)U/L。相较于空白对照组,ConA 3 h、6 h、12 h模型组小鼠ALT、AST水平明显升高(P值均<0.001);HLSC-exo 3 h、6 h治疗组ALT、AST水平较ConA 3 h、6 h模型组明显下降[(225.58±115.59)U/L vs (1989.32±347.67)U/L、(1174.71±203.30)U/L vs (2208.33±349.96)U/L,(303.53±126.68)U/L vs (2534.27±644.72)U/L、(1340.70±262.56)U/L vs (2437.13±288.13)U/L,P值均<0.001];与HLSC-exo 6 h治疗组相比,HLSC-exo 3 h治疗组下降更明显(P<0.001)。空白对照组小鼠IL-10、TNFα水平分别为(313.51±10.97)pg/mL,(476.05±7.31)pg/mL。相较于空白对照组,ConA3 h、6 h、12 h模型组IL-10水平均明显下降(P值均<0.001);HLSC-exo 3 h、6 h治疗组IL-10水平相较于ConA 3 h、6 h模型组明显升高[(331.61±10.46)pg/mL vs (266.20±8.15)pg/mL、(288.13±10.74)pg/mL vs (264.41±9.12)pg/mL,P值均<0.001];且与HLSC-exo 6 h治疗组相比,HLSC-exo 3 h治疗组升高更明显(P<0.001)。相较于空白对照组,ConA 3 h、6 h、12 h模型组TNFα水平较正常组明显升高(P值均<0.001);HLSC-exo 3 h、6 h治疗组TNFα水平相较于ConA 3 h、6 h模型组明显下降[(478.26±12.99)pg/mL vs (551.31±17.70)pg/mL、(515.58±7.18)pg/mL vs (556.21±11.15)pg/mL,P值均<0.001];且与HLSC-exo 6 h治疗组相比,HLSC-exo 3 h治疗组下降更明显(P<0.001)。小鼠肝脏大体形态及病理显示HLSC-exo 3 h、6 h治疗组肝细胞坏死程度较ConA 3 h、6 h模型组明显减轻,HLSC-exo 3 h治疗组肝小叶结构基本完整，仅可见散在点状坏死;HLSC-exo 12 h治疗组与ConA 12 h模型组相比，肝细胞坏死无明显改善。结论 成体人肝源性干细胞外泌体静脉注射可以减轻ConA诱导的小鼠急性肝损伤，以提前3 h注射保护作用最显著。通过调控细胞因子是HLSC-exo减轻肝损伤的重要机制之一。

• 单位
  济宁医学院; 济宁医学院附属医院; 菏泽医学专科学校; 首都医科大学附属北京佑安医院