人真皮间充质干细胞对增生性瘢痕成纤维细胞α-SMA和DCN表达的影响

作者：张文夺; 邓呈亮; 郭常敏; 聂开瑜; 唐修俊; 魏在荣; 王达利

来源：中华整形外科杂志, 2016, 32(04): 285-292.

• 真皮
• 间质干细胞
• 瘢痕
• 成纤维细胞
• 共同培养技术

目的初步探讨人真皮间充质干细胞(human dermis derived mesenchymal stem cells,hDMSCs)对不同时期增生性瘢痕成纤维细胞(HSFB)α-平滑肌肌动蛋白(αsmooth muscle actin,α-SMA)和核心蛋白多糖(decorin,DCN)表达的影响,以探讨间充质干细胞用于增生性瘢痕防治的可行性。方法机械法联合酶消化法分离、培养hDMSCs,取第3代生长良好的细胞,以流式细胞仪检测hDMSCs的CD分子,免疫细胞化学检测角蛋白19和波形蛋白,向成脂、成软骨和成骨细胞诱导分化。根据临床上增生性瘢痕形成的病程将瘢痕标本分为6个月、1年、2年3组,每组3例。将3组HSFB分别与第3代生长良好的贴壁hDMSCs通过非接触式Transwell共培养体系培养21 d,并分别与相对应组HSFB普通6孔板培养21 d进行对照,采用RT-PCR和Western Blot技术检测3组共培养后HSFBα-SMA和DCN的mRNA和蛋白的表达情况。结果 hDMSCs高表达CD73、CD105、CD44、CD90等间充质干细胞表面标志,不表达CD14、CD34、CD45等造血干细胞表面标志,波形蛋白阳性表达,不表达角蛋白19。经诱导可以向成脂、成软骨和成骨细胞分化,符合间充质干细胞的最低鉴定标准。普通6孔板培养的6个月、1年、2年3组HSFB的α-SMA mRNA及蛋白的表达量分别为198.20±15.46、0.29±0.070,175.24±17.04、0.38±0.110,125.73±6.99、0.33±0.085;DCN mRNA及蛋白的表达量分别为61.30±9.79、0.015±0.003,70.89±11.29、0.020±0.007,77.31±4.80、0.023±0.003。与5×104hDMSCs共培养处理后6个月、1年、2年3组HSFBα-SMA mRNA及蛋白的表达量分别48.40±6.42、0.100±0.020,192.16±11.37、0.110±0.014,73.33±6.29、0.110±0.016;DCN mRNA及蛋白的表达量分别为156.92±14.91、0.049±0.015,154.42±18.17、0.033±0.008,140.82±7.32、0.030±0.004。与普通6孔板培养相比较,共培养各组HSFB的α-SMA mRNA及蛋白表达下调,DCN mRNA及蛋白表达上调,并以增生性瘢痕形成早期即6个月组变化较明显。结论 hDMSCs在体外培养体系中可下调HSFBα-SMA mRNA和蛋白的表达、上调DCN mRNA和蛋白的表达,并且对增生性瘢痕形成早期的成纤维细胞作用较明显,hDMSCs的抗纤维化作用有望用于提高创面愈合质量和病理性瘢痕的防治。

• 单位
  遵义医学院附属医院