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摘要
目的 对细粒棘球蚴病重组多表位疫苗Eg G1Y162-2(4)进行原核表达并初步鉴定。方法 利用免疫信息学方法对基于接头序列“GSGGSG”的细粒棘球蚴病重组多表位疫苗Eg G1Y162-2(4)进行三维结构建模，分析其结构变化并评估该疫苗抗原性。通过Eco R I和SalⅠ双酶切构建p ET30a-EgG1Y162-2(4)重组质粒，将重组质粒转化入感受态细胞，利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（isopropyl-β-D-thiogalactoside, IPTG）诱导蛋白表达，Western blotting鉴定原核表达蛋白产物，并应用细粒棘球蚴病患者及健康人血清分析重组蛋白抗原性。结果 构建的重组疫苗EgG1Y162-2(4)三维结构串联的4个Eg G1Y162-2蛋白均能独立、有效表达且具有良好抗原性。重组质粒pET30a-EgG1Y162-2(4)在0.2 mmol/L IPTG37℃诱导4 h条件下，上清中目的蛋白表达量最高，使用60 mmol/L咪唑洗脱的蛋白成分较纯。Western blotting分析发现，重组多表位蛋白HIS-EgG1Y162-2(4)在约39 k Da位置处出现条带，且该蛋白可被细粒棘球蚴病患者血清识别。结论 成功构建了细粒棘球蚴重组疫苗EgG1Y162-2(4)，为研究细粒棘球蚴病重组多表位疫苗奠定了基础。
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