长寿保障同源基因2诱导Hepa1-6肝癌细胞G0/G1期阻滞的作用及其机制

作者：杨小理; 余云艳; 欧阳旭红; 向加林; 程晓明; 杨艳^*

来源：中华实验外科杂志, 2018, 35(07): 1250-1252.

• 长寿保障同源基因2
• 原发性肝细胞癌
• 细胞周期
• 核转录因子κB亚基p65
• 细胞周期蛋白D1

目的探讨长寿保障同源基因2(Lass2)对小鼠肝癌细胞Hepa1-6细胞周期的影响及其机制。方法将前期成功构建的pEGFP-Lass2采用脂质体转染法转染Hepa1-6肝癌细胞48 h,流式细胞术碘化丙锭(PI)法检测各组(阴性对照、空载、实验组)细胞周期,实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法和Western blot法检测Lass2、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、核因子-κB(NF-κB)p65 mRNA及蛋白相对表达水平,并Western blot法检测核NF-κB p65磷酸化(NF-κB p-p65)表达水平;采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖活性;为进一步验证且明确其机制,利用Hepa1-6细胞悬液肝内注射法,构建C57BL/6J小鼠原位肝癌模型,采用流体力学尾静脉分次加强注射裸质粒,转染后分别提取各组小鼠肝组织总RNA、总蛋白及核蛋白,FQ-PCR、Western blot法验证Lass2、Cyclin D1、NF-κB p65 mRNA和蛋白相对表达水平、NF-κB p65磷酸化水平。结果 Hepa1-6肝癌细胞实验组Lass2 mRNA及蛋白相对表达水平较阴性对照组、空载组明显上调(mRNA:F=1 486.895,均P=0.000;蛋白:F=55.964,均P=0.000),细胞周期G0/G1期百分比明显增高(F=239.867,均P=0.000)、G2/M期和S期明显减少(FG2/M=13.462,PG2/M=0.003,0.005;FS=46.207,均P=0.000),同时下调实验组NF-κB p65、Cyclin D1 mRNA及蛋白表达水平(mRNA:FNF-κB p65=29.993,FCyclin D1=113.260,均P=0.000;蛋白:FNF-κB p65=17.679,P=0.003,0.002;FCyclin D1=176.357,均P=0.000),NF-κBp-p65蛋白磷酸化水平明显抑制(FNF-κB p-p65=33.817,P=0.000)。结论 Lass2基因使肝癌细胞Hepa1-6的细胞周期阻滞于G0/G1期,其作用机制可能是通过抑制NF-κB的激活,下调Cyclin D1的转录与蛋白表达有关。

• 单位
  遵义医科大学; 遵义医学院附属医院