DRAM基因真核表达载体的构建及其表达对HepG_2细胞的作用

作者：倪培华; 徐洪; 胡亮; 胡翊群; 姜叙诚

来源：诊断学理论与实践, 2009, (02): 165-170.

DOI：10.16150/j.1671-2870.2009.02.003

• 损伤调节自噬调质
• DRAM
• 自噬
• 细胞凋亡
• 载体 Damage-regulated autophagy modulator
• Autophagy
• Apoptosis
• Vector

目的:构建DRAM全长cDNA的真核表达载体pEGFP-DRAM,观察DRAM在人肝细胞HepG2中的作用。方法:应用RT-PCR技术扩增获得DRAM全长cNDA,克隆扩增产物,经酶切、DNA测序鉴定正确后,构成pEGFP-DRAM的真核表达重组质粒。用脂质体将重组质粒转染入HepG2细胞,在激光共聚焦显微镜(LSCM)下观察DRAM的表达情况,用流式细胞仪检测细胞凋亡、细胞周期和死亡细胞,MTS法检测细胞增殖能力,Westernblot鉴定细胞表达蛋白质的水平,并在透射电子显微镜下观察自噬体。结果:构建完成的真核表达重组质粒pEGFP-DRAM,经DNA测序证实与GenBank中的人DRAM...

• 单位
  上海交通大学; 上海交通大学医学院附属瑞金医院