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摘要
目的 克隆人端粒酶催化亚单位 (hTERT)的启动子 ,并检测它在多种人肺癌细胞株和人胚肺成纤维细胞株中的转录活性 ,为肺癌靶向性基因治疗的研究奠定基础。方法 以人胚肾 2 93细胞基因组DNA为模板 ,应用PCR方法克隆hTERT 5′端上游旁侧序列长约 1.1kb的启动子片段 ,经DNA测序无误后克隆入荧光素酶报告质粒 pGL3 Basic的荧光素酶基因上游 ,构建 pGL3 hTERTp重组质粒 ,用脂质体法瞬时转染人肺癌细胞株A5 49、SPC A 1、LTEPa 2、NCI H44 6、YTMLC、GLC 82、A2 ,以及人胚肺成纤维细胞株MRC 5 ,转染 48h后检测hTERT启动子在各细胞株中的转录活性。结果 琼脂糖凝胶电泳显示PCR克隆的hTERT启动子片段长约 1.1kb。DNA测序结果与GenBank中hTERT启动子DNA序列完全一致 ,其 5′端和 3′端分别位于hTERT基因转录起始位点上游 112 6bp和 43bp ,片段长度为 10 84bp。采用双酶切和PCR两种方法鉴定 pGL3 hTERTp重组质粒 ,均显示构建成功。瞬时转染及荧光素酶活性检测实验显示 ,hTERT启动子在所检测的肺癌细胞株中均有高低不同的转录活性 ,而在MRC 5细胞株中无转录活性。结论 该实验克隆的 10 84bp大小的hTERT启动子在多种肺癌细胞株中均有转录活性 ,在人胚肺成纤维细胞中无转录活性。hTERT启动子有可能作为调控元件
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单位四川大学华西医院
